Título
Interacciones entre los linfocitos T y el microambiente de la metástasis ósea de cáncer de mama
Interactions between T cells and the microenvironment of bone metastases of breast cancer
Autor
DANNA LYN ARELLANO RODRIGUEZ
Colaborador
Pierrick Fournier (Asesor de tesis)
Nivel de Acceso
Acceso Abierto
Materias
Resumen o descripción
El cáncer de mama es el cáncer más frecuente en la población femenina y además es una de las principales causas de muerte en la población general. La letalidad es generalmente causada por la generación de metástasis, es decir, cuando el cáncer logra invadir órganos distantes, siendo uno de los principales sitios de metástasis el hueso. Lamentablemente, la metástasis ósea no tiene cura, por lo que es importante estudiar qué factores participan en este proceso para así poder sugerir nuevos tratamientos como la inmunoterapia, la cual consiste en incrementar la activación de los linfocitos T citotóxicos contra las células cancerosas. Sin embargo, se sabe que los linfocitos T tienen actividad osteoclastogenica en artritis reumatoide y que su actividad citotóxica puede ser inhibida por factores como TGF-beta y la hipoxia, ambos presentes en el microambiente de la metástasis ósea. El análisis de los linfocitos T en la metástasis ósea no ha sido explorado debido a que la mayoría de los modelos de metástasis ósea utiliza ratones inmunocomprometidos, los cuales carecen de linfocitos T, para permitir el desarrollo de células humanas. Por lo anterior en el siguiente trabajo se desarrolló una herramienta que permitirá detectar la actividad citotóxica de los linfocitos T citotóxicos además de comenzar a desarrollar un modelo murino singénico de metástasis ósea donde podrá la relación entre los linfocitos T y la metástasis ósea. Se probó la inoculación intracardiaca de células PyMT-R221A en ratón FVB:CIEA y se confirmó que no desarrollan metástasis ósea. Mientras que, la inoculación intratibial de células PyMT-R221A en ratones FVB desarrollo lesiones osteolíticas pero en solo el 23% de los ratones inoculados, por lo que se requieren futuras investigaciones. Por otro lado se transducieron células de cáncer de mama de ratón PyMT-R221A para que expresaran la enzima β-galactosidasa, enzima que se puede detectar en ensayos colorimétricos. Se comprobó su utilidad como herramienta para detectar actividad citotóxica al colar a las células PyMT-βgal en contacto con nanopartículas fotosensibles en un gradiente. Finalmente se aislaron linfocitos T citotóxicos de ratón FVB, se activaron in vitro y se comprobó su actividad citotóxica sobre las células PyMT-βgal.
Breast cancer is the most frequent type of cancer among women while also being one of the main causes of death in the general population. Its lethality is generally caused by the generation of metastasis, when the cancer succeeds in distal organ invasion, being bone one of the main sites for this phenomenon. Regrettably, bone metastasis has no cure, which is why it is important to study which factors participate in this process so that we can propose new treatments like immunotherapy that can be designed to increase the activity of T cells against cancer cells. However it is known that T lymphocytes have osteoclastogenic activity in rheumatoid arthritis, which could increase the development of bone metastases, and that their cytotoxic activity can be inhibited by factors such as TGF-β and hypoxia, both present in the bone metastasis microenvironment. However the role of T cells in bone metastasis is not known since most of breast cancer and bone metastasis models rely on the use of immunosuppressed mice, which lack T lymphocytes. Thus, our investigation aimed to the development of a method to detect T lymphocyte cytotoxic activity while also initiating the development of a bone metastasis syngeneic murine model to analyze the relationship between T lymphocytes and bone metastasis. The successful intracardiac inoculation of murine breast cancer cells PyMT-R221A in FVB:CIEA mice confirmed that these cells do not develop bone metastasis through intracardiac inoculation. On the other hand, intratibial inoculation of PyMT-R221A cells in FVB mice led to osteolytic lesions in only 23% of mice inoculated leading to the requirement of further investigation. PyMT-R221A cells were transduced to express β-galactosidase enzyme allowing the detection of substrate hydrolysis for colorimetric assays. The enzyme’s utility was demonstrated as a tool to detect cytotoxic activity when placing PyMT-βgal cells in contact with photosensitive nanoparticles in a gradient. Finally, FVB cytotoxic T lymphocytes were isolated, activated in vitro and their cytotoxic activity demonstrated on PyMT-βgal cells.
Fecha de publicación
2016
Tipo de publicación
Tesis de maestría
Recurso de información
Formato
application/pdf
Idioma
Español
Sugerencia de citación
Arellano Rodriguez, D. 2016. Interacciones entre los linfocitos T y el microambiente de la metástasis ósea de cáncer de mama. Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y Educación Superior de Ensenada, Baja California. 83pp
Repositorio Orígen
Repositorio Institucional CICESE
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