Título
Preparación de protoplastos de Macrocystis pyrifera mediante digestión enzimática
Autor
René García Sánchez
Colaborador
Facundo Joaquin Marquez Rocha (Asesor de tesis)
Nivel de Acceso
Acceso Abierto
Materias
Resumen o descripción
Dentro de las metodologías utilizadas en la biotecnología de vegetales, la preparación de protoplastos tiene un amplio campo de aplicaciones, en la propagación de cepas específicas, cultivos celulares para la producción de metabolitos secundarios y para la transformación genética en el mejoramiento de especies. Para la preparación de protoplastos se requiere la remoción de la pared celular de las células, proceso que puede llevarse a cabo de diferentes maneras. Un procedimiento prometedor es el uso de enzimas carbohidrolasas que permiten la remoción de la pared de manera selectiva. Una forma de seleccionar los complejos de enzimas para este propósito, es la caracterización de extractos de sistemas digestivos de ficófagos marinos consumidores de las algas pardas para obtener sus perfiles enzimáticos. En esta tesis se realizó la caracterización parcial de los extractos para algunas actividades enzimáticas relacionadas con la hidrólisis de carbohidratos. Estos extractos fueron complementados con fuentes enzimáticas comerciales para realizar un estudio de efectividad en la preparación de protoplastos. Se obtuvieron los extractos crudos de las divertículas digestivas de Aplysia califórnica y Megathura crenulata y el hepatopáncreas de Cherax quadricarinatus, examinando la presencia de las actividades enzimáticas in vitro de α-glucosidasas, β-galactosidasas, β-N-acetil-glucosaminidasas y α-amilasas usando sustratos sintéticos y actividades enzimáticas de laminarinasas, celulasas y alginato liasas usando sustratos específicos para estas actividades. Con el mismo objetivo se utilizaron enzimas comerciales como celulasas de Aspergillus niger, alginato liasas de Flavobacterium multivolum, Driselasa (presenta las actividades: laminarinasa, xinalasa y celulasa, provenientes de un hongo del género Basidiomycetes sp. Según SIGMA) y polvo de acetona de abulón (PAA, un extracto de Haliotis sp.: Sigma). Las condiciones óptimas para la actividad de α-glucosidasas en forma general fue a 40°C y pH 7.0, en contraste M. crenulata no presenta esta actividad. De manera similar sucedió con la actividad de β-N-acetil-glucosaminidasas en todas las especies a 40°C como temperatura óptima y pH7.0. para β-galactosidasas no se encontró esta actividad en C. quadricarinatus, por otro lado, en A. califórnica y M. crenulata se observó la temperatura óptima a 35°C, y pH 7.0. No se detectó actividad de α-amilasas en ninguna de las tres especies. Las mejores condiciones para la actividad laminarinasa fue 45°C en Driselasa y A. californica, para pH 5.0 en Driselasa y pH 6.0 en A. californica. Para celulasas fue a 35°C y pH 5.0 para Driselasa, 45°C y pH 7.0 para A. califórnica, y dos óptimos de actividad para PAA a 25 y 45°C a pH 5.0. Para alginato liasas fue 35°C y pH 6.0 Driselasa, y 35°C a pH para A. califórnica y PAA. De manera individual PAA produjo la mayor cantidad de protoplastos (2.9x104 protoplastos por gramo de peso fresco) y la mejor combinación enzimática, la cual fue definida por los resultados de la caracterización parcial, fue Driselasa, A califórnica y PAA con una producción de 1.1x106 (protoplastos por gramo de peso fresco) en un medio para aislamiento de protoplastos a 17°C, pH 6.5 y 12 h de digestión, produciendo cerca de 37.5 a 65.6 veces más protoplastos que al usar por separado cada extracto, suponiendo con esto un efecto sinergístico entre las distintas fuentes enzimáticas.
Editor
CICESE
Fecha de publicación
2004
Tipo de publicación
Tesis de maestría
Recurso de información
Formato
application/pdf
Idioma
Español
Sugerencia de citación
García Sánchez, R.2004.Preparación de protoplastos de Macrocystis pyrifera mediante digestión enzimática.Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California.77 h.
Repositorio Orígen
Repositorio Institucional CICESE
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