Título

Transformación genética de Paulownia elongata mediada por Agrobacterium tumefaciens y por biobalística

Autor

CARLOS ROMAN CASTILLO MARTINEZ

Nivel de Acceso

Acceso Abierto

Resumen o descripción

Tesis (Doctorado en Ciencias, especialista en Genética).- Colegio de Postgraduados, 2007.

CONACYT

Se establecieron las condiciones más propicias para transformar

genéticamente mediante sistemas directos (biobalística) e indirectos

(Agrobacterium tumefaciens), Paulownia elonganta. Se partió desde su

propagación in vitro, a través de organogénesis indirecta y directa,

encontrando como mejor explante inicial para dicha respuesta segmentos

internodales de 0.5 a 1.0 cm de longitud, con una combinación de reguladores

de crecimiento de 4 mg L-1 de BA y 0.2 mg L-1 de ANA, generándose 1.33

brotes por explante en promedio. Para la formación de callo a partir de este

tipo de tejido el mejor balance fue con TDZ 4 mg L-1, donde más de 80% de

explantes forman callo a los 10 días. Se estableció como dosis óptima para el

medio de selección 15 mg L-1 de kanamicina. Se pudieron obtener plantas

transformadas tanto por transformación mediada por Agrobacterium

tumefaciens, con 2 horas de incubación, 48 horas de co-cultivo y densidad

óptica de 0.9; así, como por biobalística, con 120 PSI de presión de disparo a

una altura del nivel 6 (16 cm) del sistema y una presión de vacío de 22 mm

Hg, usando el sistema de aceleración de partículas de baja presión (PIG). Con

los dos sistemas se obtuvieron transformantes confirmados por prueba

histoquímica de X-GLUC y por PCR, de ésta última, 14 positivos generados

por A. tumefaciens de 26 ensayos y 10 obtenidos por biobalística de 30

ensayos, en ambos casos se usó una construcción que contenía los genes de

interés quitinasa y glucanasa, el gen de selección NPT II y el gen reportero

GUS. Este es el primer reporte de la integración de los genes quitinasa y

glucanasa en P. elongata.__________The most appropriate conditions for genetic transformation through direct

(bioballistic) and indirect (Agrobacterium tumefaciens) transformation systems in

Paulownia elongata, were stablished. Starting from in vitro propagation through

both direct an indirect organogenesis, internodal stem segments with 0.5 to 1.0 cm

in length were determined as the best explant for such a response, in combination

with growth regulators at doses of 4 mg L-1 BA and 0.2 mg L-1 ANA, resulting in of

1.33 shoots per explant as an average; whereas for callus formation with the same

type of explant he best balance was obtained with TDZ 4 mg L-1, producing more

than 80% of explants with callus after 10 days. The optimum dose for selection

media was determined to be15 mg L-1of kanamycin. It was possible to obtain

transgenic plants under both transformation systems. In the case of Agrobacterium

tumefaciens, 2 hours of incubation, 48 hours of co-cultivation and optical density of

0.9 were used; while in the biobalistics case, the best conditions were 120 PSI of

shot pressure, shot height in level 6 and vaccum of 22 Hg mm, with the particle

inflow gun system (PIG). Both systems produced complete transformants as well

as chimeras as, confirmed by histochemical analysis X-GLUC and PCR, producing

a total of 14 positive plants by A. tumefaciens transformation from 26 trials and 10

posive plants by the biobalistics system from 30 trials; a construction with chitinase

and glucanase genes, NPT II selection gene and the GUS reporter gene was used

in both systems. This is the first report so far that includes integration of chitinase

and glucanase genes into P. elongata.

Fecha de publicación

2007

Tipo de publicación

Tesis de doctorado

Recurso de información

Idioma

Español

Repositorio Orígen

COLPOS DIGITAL

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