Título
Determinación de 8-Hidroxideoxiguanosina en el Adn Mitocondrial por Pcr en Tiempo Real
Autor
MARIA GUADALUPE HERNANDEZ RAMIREZ
Jorge Alejandro Alegría Torres
Nivel de Acceso
Acceso Abierto
Materias
BIOLOGÍA Y QUÍMICA - (CTI) Daño Oxidativo - ([Jóvenes en la Ciencia: Verano de la Investigación Científica Vol. 2, No.1 (2016)]) 8-oxoguanina ADN Glicosilasa de Humanos (hOGG1) - ([Jóvenes en la Ciencia: Verano de la Investigación Científica Vol. 2, No.1 (2016)]) Ciclos de amplificación (Cq) - ([Jóvenes en la Ciencia: Verano de la Investigación Científica Vol. 2, No.1 (2016)])
Resumen o descripción
Introducción. El estrés oxidativo daña al ADN por la oxidación de la base guanina y la subsecuente formación de 8-hidroxideoxiguanosina (8-OHdG). Debido a que el genoma mitocondrial no cuenta con los sistemas de reparación del ADN nuclear, el ADN mitocondrial (ADNmt) es más susceptible a sufrir daños los cuales se asocian al riesgo de desarrollar enfermedades como la diabetes y el cáncer. Materiales y métodos. A partir de una genoteca de niños de Salamanca, se estandarizó el método para la determinación de 8-OHdG el cual se llevó a cabo mediante la amplificación de un fragmento de ADN mitocondrial utilizando los oligos MTF3212 y MTR3319 en muestras tratadas y no tratadas con la enzima reparadora 8-oxoguanina ADN glicosilasa de humanos (hOGG1), la cual remueve los residuos de 8-OHdG retardando los ciclos de amplificación (Cq); este valor de diferencia entre los Cq se definió como Delta Cq. Resultados. Se amplificó un fragmento de ADN mitocondrial con los oligos utilizados, MTF3212 y MTR3319; y el valor de Cq mostró un decremento después de tratar el ADN con la enzima hOGG1 a diferentes concentraciones (1 – 10 U por reacción; P<0.05). Las muestras se trataron por triplicado aceptando solo aquellos promedios de Cq cuyos coeficientes de variación (C.V.) fueran menores al 1 %. Conclusiones. La 8-hidrodeoxiguanosina es un biomarcador del estrés oxidativo que puede ser cuantificado por qPCR permitiendo reconocer este impacto a nivel del genoma mitocondrial.
Introduction. Oxidative stress DNA damage induces the formation of 8-hydroxydeoxyguanosine (8-OHdG). The mitochondrial genome doesn´t have repair systems of nuclear DNA, mitochondrial DNA (mtDNA) is more susceptible to damage which are associated with risk of developing diseases such as diabetes and cancer. Materials and methods. The standardized of 8-OHdG were done with samples of gene bank´s Salamanca children, a fragment of mitochondrial DNA was amplified by qPCR using the MTF3212 and MTR3319 primers in treated and non-treated samples with repair enzyme human 8-oxoguanine glycosylase 1 (hOGG1), it removes 8-OHdG residues, the amplification cycles (Cq) were relayed; this difference value between Cq was defined as Delta Cq. Results. The fragment of mitochondrial DNA was amplified with MTF3212 and MTR3319 primers, The Cq value showed a decrease when the DNA samples were tretated with different concentrations hOGG1 (1 – 10 U for reaction; P <0.05). The samples were treated in triplicate, we accepted only samples featuring average Cq with Coefficient of Variation (C.V.) were less than 1%. Conclusions. The 8-hidrodeoxiguanosina is a biomarker of oxidative stress that can be quantified by qPCR, we can recognize the impact at level mitochondrial genome.
Editor
Universidad de Guanajuato
Fecha de publicación
2016
Tipo de publicación
Artículo
Versión de la publicación
Versión publicada
Recurso de información
Formato
application/pdf
Fuente
Jóvenes en la Ciencia: Verano de la Investigación Científica Vol. 2, No.1 (2016)
Idioma
Español
Relación
http://www.jovenesenlaciencia.ugto.mx/index.php/jovenesenlaciencia/article/view/1083
Repositorio Orígen
Repositorio Institucional de la Universidad de Guanajuato
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