Título
Estudios sobre Regulación Epigenética del Metabolismo Secundario en Penicillium chrysogenum
Autor
LADY VANESSA POLANIA OSORIO
Colaborador
FRANCISCO JOSE FERNANDEZ PERRINO (Asesor de tesis)
MARIA SALUD PEREZ GUTIERREZ (Asesor de tesis)
FRANCISCO FIERRO FIERRO (Asesor de tesis)
Nivel de Acceso
Acceso Abierto
Materias
Resumen o descripción
Los hongos filamentosos tienen un gran potencial para producir moléculas bioac-tivas, muchas de ellas de inter ́es para la industria farmacéutica, como por ejemplo antibióticos y antitumorales. Por ello resulta de gran inter ́es la búsqueda declusters del metabolismo secundario que sinteticen nuevos productos naturales. Sin embargo, frecuentemente estos clúster no se expresan en las condiciones habituales de cultivo en laboratorio, y en consecuencia no se sintetizan los compuestos a los que darían lugar. Estos clúster que no se expresan habitualmente se denominan “clúster silentes”, y los compuestos que sintetizan suelen denominarse “crípticos”. El silenciamiento declus-tersdel metabolismo secundario se sabe que depende principalmente de mecanismos de regulación Epigenética. Se conoce como Minería Genómica (Genome Mining) a la búsqueda de nuevas enzimas y productos a partir de la información suministrada por la secuencia de un ge-noma. En el campo del metabolismo secundario comprende un conjunto de estrategias encaminadas a la búsqueda de nuevos clúster, su expresión y la obtención de nuevos metabolitos secundarios. El objetivo de este estudio fue emplear algunas estrategias de Minería Genómica para la manipulación de la regulación Epigenética en P. chrysogenum. NRRL 1951, y provocar cambios en el perfil de metabolitos secundarios producidos. De igual forma, se realizó un análisis para la predicción de clústeres involucrados en el me-tabolismo secundario mediante el análisis del genoma del hongo utilizando el programa bioinformático anti SMASH. Una parte de este trabajo consintió en la aplicación de distintas concentraciones de dos compuestos remodeladores de la cromatina: 5-azacitidina (inhibidor de DNA metiltransferasas) y tricostatina A (inhibidor de histonas desacetilasas), a medios de cultivo líquidos de P. chrysogenum.
Uno de los medios utilizados fue el medio definido MDFP y otro el medio complejo PDB. A continuación los extractos obtenidos se analizaron por LC-MS, y los perfiles cromatógrafos generados fueron examinados con el programa MZmine2, que permitió evidenciar la aparición de cambios en el perfil de metabolitos secundarios en todas las condiciones utilizadas. Se produjeron cambios de manera más significativa en el medio PDB con la concentración de 250μM de 5-azacitidina y 1μM de tricostatina A. Se utilizaron además técnicas moleculares para modificar la regulación Epigenética. Se construyó un vector para el silenciamiento por medio de la vía RNAi (RNA inter-ferente) del gen cclA, cuyo producto hace parte del complejo COMPASS, un efector transcripcional que actúa favoreciendo el estado de heterocromatina. Con este vector de silenciamiento se obtuvieron ocho cepas transformantes de P. chrysogenum, que fueron analizadas mediante PCR para confirmar la integración del vector. Finalmente, se llevó a cabo un análisis con el software bioinformático anti SMASH de la secuencia genómica de P. chrysogenum Wisconsin 54-1255, con el objeto de predecir clúster del metabolismo secundario, dando como resultando un aumento con-siderable en el número y clase de compuestos predichos en comparación con un estudio previamente realizado en este hongo con otro programa. En resumen, en el presenten estudio se pusieron a punto varias estrategias comple-mentarias con el propósito de encontrar nuevos compuestos bioactivos producidos por. Chrysogenum.
Fecha de publicación
8 de julio de 2016
Tipo de publicación
Tesis de maestría
Recurso de información
Idioma
Español
Repositorio Orígen
Repositorio Institucional de la Universidad Autónoma Metropolitana Unidad Iztapalapa
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