Author: Ma. Guadalupe Gutiérrez Escobedo

El papel del Glutatión en la respuesta a estrés oxidante del hongo patógeno oportunista Candida glabrata

MA. GUADALUPE GUTIERREZ ESCOBEDO (2013)

"Candida glabrata es un hongo patógeno oportunista, en EUA se encuentra en el 18 a 26% de las candidiasis sistémicas. C. glabrata tiene una fuerte respuesta a estrés oxidante y en este trabajo caracterizamos el papel del glutatión (GSH), un tiol esencial que se requiere para mantener el equilibrio redox celular y en la eliminación de iones metálicos. El GSH se sintetiza a partir de ácido glutámico, cisteína y glicina mediante dos reacciones secuenciales donde intervienen las enzimas Gsh1 (gama glutamil cisteína sintetasa) y Gsh2 (glutatión sintetasa). En primer lugar hicimos un escrutinio para encontrar mutaciones supresoras que permitieran el crecimiento en ausencia del gen GSH1 (gsh1Δ) y encontramos una única mutación en el gen PRO2 (pro2-4), que codifica para la enzima γ-glutamil fosfato reductasa que cataliza la segunda reacción en la ruta de biosíntesis de la prolina. Encontramos que el GSH es importante en la respuesta a estrés oxidante ya que las mutantes gsh1Δ pro2-4 and gsh2Δ son más sensibles a estrés generado por H2O2 y menadiona. También se requiere para la tolerancia a cadmio. En ausencia de las enzimas Gsh1 y Gsh2 las células mueren rápidamente en fase estacionaria. Además, a pesar de que C. glabrata no contiene el ortólogo al transportador de GSH ScOpt1/Hgt1 nuestros datos genéticos y bioquímicos muestran que las mutantes gsh1Δ pro2-4 and gsh2Δ pueden incorporar GSH del medio. Finalmente, reportamos que los sistemas GSH y tiorredoxina, el segundo sistema redox celular, no son esenciales para la respuesta de adaptación a H2O2 independiente de la catalasa."

"Candida glabrata, an opportunistic fungal pathogen, accounts for 18-26% of all Candida systemic infections in the US. C. glabrata has a robust oxidative stress response and in this work we characterized the role of glutathione (GSH), an essential tripeptide-like thiol-containing molecule required to keep the redox homeostasis and in the detoxification of metal ions. GSH is synthesized from glutamate, cysteine and glycine by the sequential action of Gsh1 (gammaglutamyl- cysteine synthetase) and Gsh2 (glutathione synthetase) enzymes. We first screened for suppressor mutations that would allow growth in the absence of GSH1 (gsh1Δ background) and found a single point mutation in PRO2 (pro2-4), a gene that encodes a gamma-glutamyl phosphate reductase and catalyzes the second step in the biosynthesis of proline. We demonstrate that GSH is important in the oxidative stress response since the gsh1Δ pro2-4 and gsh2Δ mutant strains are more sensitive to oxidative stress generated by H2O2 and menadione. GSH is also required for Cadmium (Cd) tolerance. In the absence of both Gsh1 and Gsh2, cells die rapidly in stationary phase. Furthermore, C. glabrata does not contain the Saccharomyces cerevisiae high affinity GSH transporter orthologue, ScOpt1/Hgt1, however our genetic and biochemical experiments show that the gsh1Δ pro2-4 and gsh2Δ mutant strains are able to incorporate GSH from the medium. Finally, GSH and thioredoxin, which is a second redox system in the cell, are not essential for the catalase-independent adaptation response to H2O2."

Doctoral thesis

Catalasa tiorredoxina Estrés oxidante Supresora PRO2 Tolerancia a cadmio Glutatión Candida glabrata BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA BIOLOGÍA MOLECULAR

Molecular characterization of the silencing complex SIR in Candida glabrata hyperadherent clinical isolates

OSNEY LEIVA PELAEZ Ma. Guadalupe Gutiérrez Escobedo EUNICE LOPEZ FUENTES JOSE CRUZ MORA Alejandro de las Peñas Nava Irene Beatriz Castaño Navarro (2018)

"An important virulence factor for the fungal pathogen Candida glabrata is the ability to adhere to the host cells, which is mediated by the expression of adhesins. Epa1 is responsible for ?95% of the in vitro adherence to epithelial cells and is the founding member of the Epa family of adhesins. The majority of EPA genes are localized close to different telomeres, which causes transcriptional repression due to subtelomeric silencing. In C. glabrata there are three Sir proteins (Sir2, Sir3 and Sir4) that are essential for subtelomeric silencing. Among a collection of 79 clinical isolates, some display a hyperadherent phenotype to epithelial cells compared to our standard laboratory strain, BG14. These isolates also express several subtelomeric EPA genes simultaneously. We cloned the SIR2, SIR3 and SIR4 genes from the hyperadherent isolates and from the BG14 and the sequenced strain CBS138 in a replicative vector to complement null mutants in each of these genes in the BG14 background. All the SIR2 and SIR4 alleles tested from selected hyper-adherent isolates were functional and efficient to silence a URA3 reporter gene inserted in a subtelomeric region. The SIR3 alleles from these isolates were also functional, except the allele from isolate MC2 (sir3-MC2), which was not functional to silence the reporter and did not complement the hyperadherent phenotype of the BG14 sir3?. Consistently, sir3-MC2 allele is recessive to the SIR3 allele from BG14. Sir3 and Sir4 alleles from the hyperadherent isolates contain several polymorphisms and two of them are present in all the hyperadherent isolates analyzed. Instead, the Sir3 and Sir4 alleles from the BG14 and another non-adherent isolate do not display these polymorphisms and are identical to each other. The particular combination of polymorphisms in sir3-MC2 and in SIR4-MC2 could explain in part the hyperadherent phenotype displayed by this isolate."

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Candida glabrata Hyperadherence Clinical isolates SIR complex Polymorphisms SIR3 SIR4 BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA MICROBIOLOGÍA MICOLOGÍA (LEVADURAS) MICOLOGÍA (LEVADURAS)

Candida glabrata’s genome plasticity confers a unique pattern of expressed cell wall proteins

EUNICE LOPEZ FUENTES Ma. Guadalupe Gutiérrez Escobedo Bea Timmermans Patrick Van Dijck Alejandro de las Peñas Nava Irene Beatriz Castaño Navarro (2018)

"Candida glabrata is the second most common cause of candidemia, and its ability to adhere to different host cell types, to microorganisms, and to medical devices are important virulence factors. Here, we consider three characteristics that confer extraordinary advantages to C. glabrata within the host. (1) C. glabrata has a large number of genes encoding for adhesins most of which are localized at subtelomeric regions. The number and sequence of these genes varies substantially depending on the strain, indicating that C. glabrata can tolerate high genomic plasticity; (2) The largest family of CWPs (cell wall proteins) is the EPA (epithelial adhesin) family of adhesins. Epa1 is the major adhesin and mediates adherence to epithelial, endothelial and immune cells. Several layers of regulation like subtelomeric silencing, cis-acting regulatory regions, activators, nutritional signaling, and stress conditions tightly regulate the expression of many adhesin-encoding genes in C. glabrata, while many others are not expressed. Importantly, there is a connection between acquired resistance to xenobiotics and increased adherence; (3) Other subfamilies of adhesins mediate adherence to Candida albicans, allowing C. glabrata to efficiently invade the oral epithelium and form robust biofilms. It is noteworthy that every C. glabrata strain analyzed presents a unique pattern of CWPs at the cell surface."

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Candida glabrata Cell wall proteins Adherence Virulence Fluconazole resistance Genome plasticity Subtelomeric silencing Clinical isolates BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA MICROBIOLOGÍA MICROBIOLOGÍA

Chromatin loop formation induced by a subtelomeric protosilencer represses EPA genes in Candida glabrata

EUNICE LOPEZ FUENTES GRECIA HERNANDEZ HERNANDEZ Leonardo Castanedo Ibarra Ma. Guadalupe Gutiérrez Escobedo KATARZYNA OKTABA SOSIN Alejandro de las Peñas Nava Irene Beatriz Castaño Navarro (2018)

"Adherence, an important virulence factor, is mediated by the EPA (Epithelial Adhesin) genes in the opportunistic pathogen Candida glabrata. Expression of adhesin-encoding genes requires tight regulation to respond to harsh environmental conditions within the host. The majority of EPA genes are localized in subtelomeric regions regulated by subtelomeric silencing, which depends mainly on Rap1 and the Sir proteins. In vitro adhesion to epithelial cells is primarily mediated by Epa1. EPA1 forms a cluster with EPA2 and EPA3 in the right telomere of chromosome E (E-R). This telomere contains a cis-acting regulatory element, the protosilencer Sil2126 between EPA3 and the telomere. Interestingly, Sil2126 is only active in the context of its native telomere. Replacement of the intergenic regions between EPA genes in E-R revealed that cis-acting elements between EPA2 and EPA3 are required for Sil2126 activity when placed 32 kb away from the telomere (Sil@-32kb). Sil2126 contains several putative binding sites for Rap1 and Abf1, and its activity depends on these proteins. Indeed, Sil2126 binds Rap1 and Abf1 at its native position and also when inserted at ?32 kb, a silencing-free environment in the parental strain. In addition, we found that Sil@-32kb and Sil2126 at its native position can physically interact with the intergenic regions between EPA1-EPA2 and EPA2-EPA3 respectively, by chromosome conformation capture assays. We speculate that Rap1 and Abf1 bound to Sil2126 can recruit the Silent Information Regulator complex, and together mediate silencing in this region, probably through the formation of a chromatin loop."

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Candida glabrata Cis-elements Transcriptional regulation Protosilencer EPA genes Rap1 Chromatin loop BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA GENÉTICA GENÉTICA

Candida glabrata encodes a longer variant of the mating type (MAT) alpha2 gene in the mating type-like MTL3 locus, which can form homodimers

KARINA ASYADE ROBLEDO MARQUEZ Ma. Guadalupe Gutiérrez Escobedo Patricia Yáñez Carrillo YAMILE VIDAL AGUIAR Marcela Cecilia Briones Martín del Campo Emmanuel Orta Zavalza Alejandro de las Peñas Nava Irene Beatriz Castaño Navarro (2016)

"The fungal pathogen Candida glabrata is a haploid asexual yeast. Candida glabrata contains orthologs of the genes that control mating and cell-type identity in other fungi, which encode putative transcription factors localized in the MAT locus in Saccharomyces cerevisiae or MTL in other fungi. Candida glabrata contains three copies of the CgMTL locus but only CgMTL1 correctly expresses the information encoded in it. CgMTL1 can encode the Cga1 gene (a information), or the Cgalpha1 and Cgalpha2 genes (alpha information). CgMTL2 contains an identical copy of the Cga1 gene. CgMTL3 contains an identical copy of the Cgalpha1 gene but a longer variant of the Cgalpha2 gene that we termed Cgalpha3. In S. cerevisiae diploid cells, that express Sca and Scalpha information, Sca1 and Scalpha2 proteins form a heterodimer, which represses genes expressed only in haploid cells and some genes involved in stress response. We constructed C. glabrata strains that simultaneously express Cga1 and Cgalpha2 or Cga1 and Cgalpha3 genes. We did not find any phenotype in these strains when grown under a large variety of stress and nutritional conditions. However, we detected an interaction between Cga1 and Cgalpha2 but not between Cga1 and Cgalpha3 by Bimolecular Fluorescence Complementation and co-immunoprecipitation assays."

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Candida glabrata Mating type-like loci (MTL) MTL-encoded genes Transcription factors Cga1-Cgalpha2 heterodimer Cgalpha3-Cgalpha3 homodimer BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA MICROBIOLOGÍA MICROBIOLOGÍA

Violencia de género. Escenarios y quehaceres pendientes

JUANA ALMA ROSA SANCHEZ OLVERA EVA RAQUEL GUERECA TORRES Fannella Giusti Minotre MARTHA CAROLINA SERRANO BARQUIN TANIA MORALES REYNOSO OLIVIA TENA GUERRERO Renata Aldaz Portas Irvin Javier Espinosa Gutiérrez Jorge Olvera García LUZ MARIA CONSUELO JAIMES LEGORRETA MARIA DEL ROSARIO VARELA ZUÑIGA JOSE MARIA ARANDA SANCHEZ MARIA ISABEL LARA ESCOBEDO Ma Guadalupe Graciela Vélez Bautista (2015)

La obra Violencia de género. Escenarios y quehaceres pendientes es producto de la importancia que para la Universidad Autónoma del Estado de México representa profundizar en los problemas sociales, como la violencia contra las mujeres, que para ser atendida y pueda disminuir requiere de la investigación multidisciplinaria. Asimismo, del interés que se tiene en vincular el conocimiento científico con el quehacer del sector público y las tareas gubernamentales. El objetivo es que el libro sea de interés para toda aquella población cuya tarea se dirija a atender el maltrato a las mujeres desde las instituciones hasta las organizaciones civiles, y sea de provecho para la comunidad universitaria. Al respecto, el Centro de Investigación en Estudios de Género y Equidad propició el espacio para establecer un debate con especialistas en estudios de género de distintas universidades, que permitió reconocer los avances y quehaceres pendientes relacionados con la eliminación de la violencia de género, así como explicar sus causas y las sugerencias para eliminarla o aminorarla. En este sentido, la obra contribuye a cumplir con uno de los objetivos de esta Casa de Estudios: difundir la perspectiva de igualdad de género, en relación con el respeto de los Derechos Humanos de las mujeres y de los hombres. Cabe reconocer la colaboración de los cuerpos académicos que conforman la Red de Fortalecimiento de la Equidad de Género de la uaem, así como la participación de las investigadoras de la Universidad Nacional Autónoma de México y de la Universidad Nacional de Costa Rica.

El presente volumen Violencia de género: escenarios y quehaceres pendientes, es un texto que integra el resultado de una serie de investigaciones, que diversas/os especialistas nacionales y extranjeras/os que desde varias disciplinas y espacios han obtenido acerca de la dinámica y/o prevención de la violencia de género. El libro inicia con un capítulo intitulado: “Estudiantes universitarios y violencia en el salón de clase”, debido a que las sociólogas Alma Rosa Sánchez Olvera y Raquel Güereca Torres, se dieron a la tarea de indagar situaciones violentas en las aulas de la Facultad de Estudios Superiores de Acatlán (unam) y de la Universidad Autónoma Metropolitana-Azcapotzalco. A través de la aplicación de una encuesta y varias entrevistas grupales realizadas entre algunos núcleos del estudiantado universitario, las investigadoras identificaron los tipos de violencia que las y los estudiantes dicen vivir en el salón de clase, particularmente las referidas en la relación docente alumna/o. Asimismo, las autoras encontraron interesantes diferencias en los rasgos identitarios de las y los estudiantes de esas instituciones. También en el trabajo se discute qué es la violencia escolar y cómo se manifiestan las relaciones de poder en el salón de clase. De acuerdo con las investigadoras, dentro de los hallazgos más importantes destacan las asimetrías en el espacio escolar, expresadas en una desigualdad intergenérica e intragénerica, lo cual indica que la violencia de género es también padecida y ejercida por los hombres, y no sólo incide sobre las mujeres. De igual manera, la investigación aporta testimonios acerca del abuso que algunas mujeres (investidas de cierto poder o autoridad) ejercen contra sus congéneres o hacia los varones. El estudio también consideró las formas sutiles de la violencia, como la presión psicológica, la discriminación social, la imposición cultural, variantes de la violencia simbólica, abanico de posibilidades que intenta explicar las relaciones de dominio maestra/o-alumna/o, personal administrativo-alumnas/os, así como entre alumnas/os en el nivel académico. También, interesada en el tema de la violencia sexual en ambientes escolares, Fannella Giusti Minotre presenta el trabajo: “Percepciones del hostigamiento sexual en la academia: la experiencia de la Universidad Nacional de Costa Rica”, donde la autora expone un resumen de los principales hallazgos obtenidos en el Diagnóstico de percepciones del hostigamiento sexual en autoridades de la Universidad Nacional de Costa Rica, investigación que se desarrolló durante 2011. El estudio se inscribió en el marco del proyecto “Implementación y Ejecución de la Política Institucional contra el Hostigamiento Sexual en la una”, y respondió a la necesidad de diagnosticar los mecanismos institucionales que legitiman y perpetúan el ejercicio de prácticas de hostigamiento sexual en la universidad nacional del país centroamericano. Del mismo modo, este diagnóstico permitió identificar la necesidad de continuar con esta línea de investigación en el espacio universitario referido, ya que es indispensable profundizar y sistematizar las formas, manifestaciones, prevalencia, causas, actores involucrados en el hostigamiento sexual, para su eventual erradicación.

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Violencia de género CIENCIAS SOCIALES