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Análisis micoquímico y potencial terapéutico de pleurotus ostreatus

BLANCA PATRICIA LAZALDE RAMOS ROSALINDA GUTIERREZ HERNANDEZ (2019)

Los hongos comestibles pueden ser una alternativa terapéutica para infecciones causadas por

bacterias, debido a sus propiedades farmacológicas reportadas; un ejemplo de éstos son los

basidiomicetos que han demostrado ser relevantes en la producción de metabolitos secundarios.

Nuestro objetivo fue determinar la actividad antibacteriana de extractos de Pleurotus ostreatus. Se

obtuvieron tres extractos mediante el uso de: Metanol (M), Cloroformo (C) y Agua (A); mezclando en

diferentes proporciones: Extracto 1) 3(A):1(M):1(C), Extracto 2) 2(M):2(C):1(A), y Extracto 3) A,

mediante un procedimiento a base de secado y macerado, posteriormente se realizaron pruebas

colorimétricas para la identificación de metabolitos secundarios. El análisis micoquímico evidenció

para el extracto acuoso la presencia de alcaloides, azúcares reductores, flavonoides, quinonas y

saponinas; para el extracto 1 se evidenciaron alcaloides, azúcares reductores, cumarinas,

flavonoides, glucósidos cardiacos y quinonas; y para el extracto 2 sólo se identificó la presencia de

alcaloides. La actividad antibacteriana se evaluó mediante difusión en placa por medio del método

de Kirby-Bauer.

Producción Científica de la Universidad Autónoma de Zacatecas UAZ

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BIOLOGÍA Y QUÍMICA pleurotus ostreatus hongos

trichoderma spp. y su efecto en la micoflora en semillas de maiz (zea mays) sembradas en campo

JOSE LUIS ARISPE VAZQUEZ (2018)

"El maíz es uno de los principales cultivos para los mexicanos, siendo para consumo humano, forraje y para la industria, sin embargo, es afectado por enfermedades, en la que destaca la pudrición de la mazorca, el objetivo de este trabajo fue evaluar la capacidad de las cepas de Trichoderma asperellum T11, Trichoderma harzianum T1 4 y Trichoderma longibrachiatum T1 40 para reducir la incidencia y severidad de esta enfermedad. Las semillas se trataron con melaza al 5 % y Trichoderma spp. a 1x108 esporas/ ml, Captan como testigo químico en Coahuila y Benomyl 50 en Morelos y un testigo absoluto en ambos lugares, la siembra se realizó en un diseño de bloques completamente al azar, cuatro genotipos con cuatro repeticiones. Se evaluó a los 130 días, los datos se ajustaron mediante la transformación arco seno de la raíz cuadrada, la incidencia mediante un análisis fenotípico de las plantas, 15 en Coahuila y 50 en Morelos por repetición, la severidad por escala de León, (1997), los resultados se ajustaron mediante la transformación arco seno de la raíz cuadrada y se procesaron en un análisis factorial de bloques al azar AxB, 4 niveles en A y 5 en B, con 4 repeticiones, en el programa (FAUANL) versión 2.5, mediante Tukey con nivel de significancia de 0.05. Debido a condiciones climáticas y edáficas distintas, las cepas de Trichoderma se comportaron diferente, reduciendo la incidencia en Tepalcingo entre 29.83 al 18.43% y en Saltillo del 16.25 al 2.92% y la severidad en Tepalcingo entre 26.64 al 21.22 % y 28.52 al 23.20% en Saltillo"

"Maize is one of the main crops for Mexicans, being for human consumption, fodder and for industry, however is affect by diseases, in which corn rot stands out, the objective of this work was to evaluate the capacity of the strains of Trichoderma asperellum T11, Trichoderma harzianum T1 4 and Trichoderma longibrachiatum T1 40 to reduce the incidence and severity of this disease. The seeds were treated with 5% molasses and Trichoderma spp. at 1x108 spores / ml, Captan taken as a chemical control in Coahuila and Benomyl 50 in Morelos and an absolute control in both places, the seeding was carried out in a completely randomized block design, four genotypes with four replications. It was evaluated at 130 days, the data were adjusted by means of the transformation Sine arc of the square root, the incidence by means of a phenotypic analysis of the plants, 15 in Coahuila and 50 in Morelos by repetition, the severity by Leon scale, (1997 ), the results were adjusted by the transformation arc sine of the square root y were processed in a factor analysis of random blocks AxB, 4 levels in A and 5 in B, with 4 repetitions, in the program (FAUANL) version 2.5, by means of Tukey with significance level of 0.05. Due to different climatic and edaphic conditions, the Trichoderma strains behaved differently, reducing the incidence in Tepalcingo between 29.83 to 18.43% and in Saltillo from 16.25 to 2.92% and the severity in Tepalcingo between 26.64 to 21.22% and 28.52 to 23.20% in Saltillo"

Master thesis

Maíz Hongos Biológico Enfermedades CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

La tenia de nematodos: el hongo parásito spirogyromyces vermicola en poblaciones de rhabditis (nematoda) y caenorhabditis elegans

MARTHA SANTIS SANTIS (2016)

"Spirogyromyces vermicola es capaz de desarrollarse en Rhabditis sp. y liberar sus conidias maduras a través del ano de los nematodos al medio para perpetuar su especie. Se desconoce si puede penetrar e infectar a otras especies de nematodos y hasta qué punto puede afectar la población de Rhabditis sp; por lo que el objetivo de este trabajo fue responder estas interrogantes. Para el aislamiento de S. vermicola se empleó la metodología propuesto por Barron (1967). Se identificó el hongo a partir de muestras de suelo. Se tomaron cinco nematodos infectados, los cuales se colocaron en cajas de Petri con poblaciones de Rhabditis sp. no infectadas previamente establecidas. De esta manera se establecieron poblaciones de Rhabditis sp. infectadas con S. vermicola. Para evaluar si S. vermicola puede establecerse en Caenorhabditis elegans, se fragmentaron veinte nematodos infectados de Rhabditis sp. y se colocaron en cajas que contenían poblaciones de C. elegans. Para determinar el porcentaje de infección y efecto del hongo sobre poblaciones de Rhabditis sp., se colocaron diez cajas de Petri con papel de estraza húmedo con diez nematodos infectados y diez no infectados; once días después de la inoculación se extrajo el papel y se colocó en frascos de vidrio con 20mL de agua, se agitó y prepararon montas de la suspensión para observar el porcentaje de infección; se contabilizó el total de la población. Se realizó el mismo procedimiento para C. elegans con la diferencia de que las observaciones se realizaron en medio PDAYH (Agar papa dextrosa, extracto de levadura y yema de huevo). El efecto de S. vermicola en Rhabditis sp. y C. elegans, no fue estadísticamente significativo; en Rhabditis sp., aun cuando redujo 21.2% la población, con una incidencia del 59%. Por otro lado si logra establecerse en C. elegans con una incidencia del 45% y una reducción en la población de 8.5%. Por tanto en estas observaciones, S. vermicola no afecta las poblaciones de nematodos aun cuando completa su ciclo de vida en el hospedero."

ABSTRACT: Spirogyromyces vermicola is able to develop in Rhabditis sp. and release its mature conidia through the anus of nematodes as the means to perpetuate their species; it is unknown whether it can penetrate and infect another species of nematodes and to what extent it can affect the population of hosts; so the aim of this study was to answer these questions. For isolation of S. vermicola we used the methodology of Barron (1967); two weeks after sampling, five infected nematodes were taken, and placed in Petri dishes with uninfected populations of Rhabditis sp. previously established, in order to establish infected populations of Rhabditis. To assess whether S. vermicola can infect another host, twenty infected Rhabditis sp nematodes were fragmented and placed in petri dishes containing populations of Caenorhabditis elegans. To determine the percentage of infection and effect of the fungus on nematode populations, ten Petri dishes were set with wet brown bag paper and mealworms as nematode food. Ten infected and ten uninfected nematodes were placed in dishes. Eleven days after inoculation the paper was removed and placed in glass jars with 20 mL of water, stirred and the suspension was observed to determine the percentage of infection and total population. The same procedure was repeated for C. elegans with the difference that observations were made on PDAYH (potato dextrose agar, yeast extract and egg yolk). The effect of S. vermicola in Rhabditis sp. and C. elegans, was not statistically significant even though in Rhabditis sp., populations were reduced 21.2% with an incidence (infected individuals) of 59%. For C. elegans, there was an incidence of 45% and a reduction in population of 8.5%. S. vermicola did not affect nematode populations even though it completes its life cycle in hosts.

Master thesis

Hongos Parasitos Enfermedades Spirogyromyces vermicola, CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Actividad de formulaciones en aceite de nomuraea rileyi (farlow) samson e isaria tenuipes (peck) samson, sobre larvas de cuatro lepidopteros

PAULINA VEGA AQUINO (2008)

"Se llevaron a cabo bioensayos para evaluar la actividad de conidias de los hongos entomopatógenos Nomuraea rileyi e Isaria tenuipes suspendidas en aceite, sobre larvas de Spodoptera frugiperda, Spodoptera exigua, Helicoverpa zea, y Heliothis virescens. Las pruebas consistieron en dos secciones de bioensayos. En la primera sección se utilizaron cepas de N. rileyi (recién colectadas) y una cepa de I. tenuipes, sobre S. frugiperda. Las conidias fueron suspendidas en agua con Tween 80, en aceites vegetales (canola y soya) y en aceite mineral. Ambos hongos fueron altamente compatibles con los aceites y causaron mortalidades de 100 % o cercanas, en casi todos los tratamientos en aciete; los valores más bajos de TL50 fueron obtenidos para N. rileyi en aceite mineral (4.7 días); para I. tenuipes en aceite de soya 6.0 días. En la segunda sección de bioensayos se utilizaron cepas de la colección del USDA- ARSEF en formulaciones en aceite (mineral, canola, oliva, girasol y cacahuate) sobre estados inmaduros de Spodoptera frugiperda, Spodoptera exigua, Helicoverpa zea, y Heliothis virescens en aceite mineral y aceite de canola se registraron las más altas mortalidades sobre especies de Spodoptera, en aceite mineral se obtuvieron los mejores resultados, los valores de TL50 fueron 2.5 días para la cepa 135, y 2.9 para la cepa 762. Para I. tenuipes los valores más bajos (5.1 a 5.6 días) fueron obtenidos en las formulaciones en aceite mineral sobre Spodoptera spp. y H. zea respectivamente. Adicionalmente, se hicieron bioensayos con ambos hongos sobre prepupas de las cuatro especies, los mejores resultados se obtuvieron sobre S. exigua: 90% (cepa 4096) y 100 % (cepa 2488) de I. tenuipes, and cepa 135 de N. rileyi sobre S. frugiperda (95%). La actividad específica de las diferentes formulaciones dependió de la especie de hospedero y el aceite usado. Los resultados sugieren futuras evaluaciones en campo"

"Bioassays were carried out to evaluate the activity of oil-suspended conidia of the fungal entomopathogens Nomuraea rileyi and Isaria tenuipes against larvae of Spodoptera frugiperda, Spodoptera exigua, Helicoverpa zea, and Heliothis virescens. The tests consisted of two bioassay sets. In the first test set we tested strains of N. rileyi (freshly isolated) and of I. tenuipes against S. frugiperda. Conidia were suspended in water + Tween 80% and in vegetable (canola, soybean) and mineral oils. Both fungi were highly compatible with oils and caused mortalities of 100 % or near in almost all oil treatments; the lowest LT50 was obtained for N. rileyi in mineral oil (4.7 days); for I. tenuipes in soybean oil, 6.0 days. At the second test set were tested strains from the USDA-ARSEF collection in oil formulations (mineral, canola, sunflower, olive and peanut oils) against inmature stages of S. exigua, S. frugiperda, H. zea and H. virescens. Nomuraea rileyi in mineral oil formulations induced the highest mortalities (100 %) against Spodoptera spI., the LT50 was 2.5 days (strain 135) and 2. 9 days (strain 762). For I. tenuipes the lowest LT50 values (5.1 to 5.6 days) were obtained in mineral oil formulations against Spodoptera spI. and H. zea respectively. Additionally, we tested both fungi against prepupae of all four lepidopteran species; mortality was similar for both fungi across host species, except for two strains of I. tenuipes against S. exigua: 90% (strain 4096) and 100 % (strain 2488), and strain 135 of N. rileyi against S. frugiperda (95%). The specific activity of different formulations was dependent of host species and oil used. These results suggest further evaluation of these entomopathogens, with oil application technologies in agriculture, particularly in organic and sustainable settings. "

Master thesis

Larvas Hongos Genero CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Identificación y patogenicidad de hongos en muérdago (phoradendron bolleanum = p. saltillense trel. en Arteaga y Saltillo, Coahuila

MARIA PAZ PONCE (2013)

"La SEMARNAT (2005) reporta que en Coahuila existen 200 hectáreas afectadas por diferentes especies de muérdago, cantidad que para el siguiente año se multiplicó por 10 y un poco más subiendo a 2059 has; de estas existencias, del 40 al 100% pertenece al género Phoradendron sp. (Zavaleta, 2008) que se encuentra en la zona del Cañón de los Lirios de la Sierra de Arteaga. Además en Saltillo ya está atacando a los nogales, por lo que se realizó el siguiente estudio para investigar qué hongos pueden atacar al muérdago y se propuso el objetivo de encontrar un hongo que fungiera como control biológico para estas plantas parásitas. Se llevaron a cabo recolectas de muérdagos con hongos en la Sierra de Arteaga, y Saltillo, las cuales se trasladaron al laboratorio de Fitopatología del Departamento de Parasitología Agrícola de la UAAAN, donde se sembraron en medios de cultivo Papa Dextrosa Agar (PDA), para su aislamiento e identificación; Posteriormente, por medio de la técnica de la hoja desprendida de Bañuelos (2008) se inocularon los hongos al muérdago; en un primer bioensayo se puso una caja petri con papel filtro húmedo y una hoja de muérdago, a la cual se le añadió un explante de 0.5 cm de PDA con hongo y en un segundo bioensayo, se hizo lo mismo pero ahora se inocularon las hojas con una suspensión de esporas, estas cajas se sellaron y se dejaron a 25°C para qu e creciera el hongo, se midió la necrosis en cm con un vernier hasta que cubrió a la hoja por completo. La evaluación se hizo con un diseño completamente al azar, con arreglo factorial 4 X 17 con 7 repeticiones por cada tratamiento, el número de tratamientos fue de acuerdo al número de hongos, para el primer bioensayo; para el segundo bioensayo fue con un arreglo factorial 7 X 8 con 7 repeticiones. Los análisis estadísticos se hicieron con el programa estadístico SAS, 2004, obteniéndose la prueba Tukey y la DMS (diferencia mínima Significativa). Los resultados fueron: 3 hongos encontrados: Fusarium oxysporum, Alternaria alternata y Alternaria infectoria; en el primer bioensayo, en los cuatro tratamientos no hubo significancia en la interacción muérdago X días, pero sí superó Fusarium oxysporum en necrosis al resto con un 99.9% de confianza. El nivel de significancia utilizado en la prueba de comparación múltiple entre medias fue 0.001. Para el segundo bioensayo, en el análisis de varianza se encontró diferencia altamente significativa en la interacción de los 7 tratamientos de hongos y los 8 días al 99.9% de confianza. Por lo que se concluye que Fusarium oxyosporum fue superior que los demás para un futuro control del muérdago Phoradendron bolleanum"

The SEMARNAT (2005) reports for Coahuila 200 hectares affected by different species of mistletoe, an amount that for the following year was multiplied by 10 and a little more up to 2059 hectares. Of these stocks belong a 40 to 100% to the genus Phoradendron (Zavaleta, 2008), that is in the area of Cañón de los Lirios of the Sierra de Arteaga. In Saltillo actually is attacking the walnuts, so the following study was conducted to find out which fungi can attack the mistletoe and set the objective of finding a fungus who could act as a biological control for these parasitic plants. It were performed collects of mistletoes with fungus in the Sierra de Arteaga, and Saltillo, which were transferred to the laboratory of Plant Pathology, Department of Agricultural Parasitology UAAAN, where they were planted in culture media Potato dextrose agar (PDA) to subsequent isolation and identification. Subsequently, through the technique of detached leaf Bañuelos (2008) were inoculated fungi to mistletoe; in first bioassay it was placed a petri dish with wet filter paper and a leaf of mistletoe, to which was added a 0.5 cm explant fungus PDA and in a second bioassay was the same but now the leaves were inoculated with a spore suspension, these boxes were sealed and left at 25 ° C to grow the fungus; necrosis was measured with vernier cm until the leaf was completely filled. The evaluation was done with a completely randomized design with factorial arrangement 4 X 17 with 7 replications per treatment, the number of treatments was based on the number of fungi, for the first bioassay; for the second bioassay was with a factorial arrangement 7 X 8 with 7 reps. Statistical analysis were done with the program SAS, 2004 and means were compared using the Tukey test and LSD test (least significant difference). The results were: 3 fungi found: Fusarium oxysporum, Alternaria alternata and Alternaria infectoria, in the first bioassay, in the four treatments were not significant in the interaction mistletoe X days, but Fusarium oxysporum necrosis exceeded the rest with 99.9% confidence. The significance level used in multiple comparison test between means was 0.001. For the second bioassay, analysis of variance was found highly significant difference in the interaction of the 7 treatments fungi and 8 days at 99.9% confidence level. So it is concluded that Fusarium oxyosporum was higher than the others for future control of mistletoe Phoradendron bolleanum.

Master thesis

Hongos Identificación Control Biológico CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Actividad antifungica de extractos de plantas con y sincera de candelilla, contra hongos de postcosecha en frutos de interés comercial.

LUIS ELIGIO MORENO ZUCCOLOTTO (2009)

"El presente trabajo se realizó en dos partes, la primera fue la prueba de inhibición in vitro de los hongos estudiados. En la segunda parte se realizó una prueba in vivo con la aplicación de los dos mejores extractos de la primera prueba en emulsión con cera de candelilla y agua como recubrimientos de frutos para evaluar la vida de anaquel con y sin inóculo de los hongos estudiados. Se utilizaron hojas de Lippia graveolens, Yucca filifera, Yucca carnerosana y Agave lechuguilla, colectadas en el Desierto Chihuahuense, en el Sureste del Estado de Coahuila. Se utilizaron etanol y hexano, solventes de diferente polaridad, para obtener los extractos de las plantas, estos extractos fueron mezclados individualmente en medio PDA y se vaciaron en cajas Petri utilizando dosis de 0, 500, 1000, 2000, 3000, 4000 y 5000 ppm, para después ser inoculadas con cepas monospóricas de Colletotrichum sp. Penicillium sp. y Rhizopus sp. Las variables evaluadas fueron: crecimiento micelial y número de esporas. Todos los extractos provocaron inhibición en el desarrollo del micelio y cantidad de esporas, pero solo se consideró la inhibición total con la dosis mas baja, es decir la menor dosis que inhibió al 100 % el desarrollo de los hongos estudiados, para ser utilizados en la prueba in vivo de cubiertas de frutos. Los extractos etanólico y hexánico de Lippia graveolens inhibieron el desarrollo del micelio y la esporulación al 100 % de Rhizopus sp. y Colletotrichum sp. en 500 ppm, al micelio de Penicillium sp. en 3000 ppm y a las esporas en 2000 ppm. El extracto etanólico de Agave lechuguilla inhibió al 37 % el micelio en Rhizopus sp. y la esporulación en 77.1 % en la dosis de 5000 ppm en Colletotrichum sp. la inhibición del micelio y la esporulación fue del 100 % en la dosis de 500 ppm y en Penicillium sp. la inhibición del micelio fue de 84 % y de la esporulación 52.6 % en 5000 ppm. Con el extracto hexánico de A. lechuguilla la inhibición en la esporulación de Rhizopus sp. fue de 100 % en la dosis de 500 ppm y 3000 en el micelio. En Colletotrichum sp. la inhibición fue de 91.1 % para el micelio y 99.7 % en la esporulación en la dosis de 5000 ppm y en Penicillium sp. la inhibición fue 84 y 90.5 % con 5000 ppm. La inhibición causada con el extracto etanólico de Y. carnerosana en Rhizopus sp. fue de 40 % para el micelio y 30.8 % en la esporulación, para Colletotrichum sp. 55 % en la dosis de 5000 ppm y con el extracto hexánico la inhibición del micelio y esporulación en Rhizopus sp. fue del 100 % con 3000 ppm, en Colletotrichum sp. de 28.9 y 65.5 % y para Penicillium sp. 44 y 61.6 % en la dosis de 5000 ppm. Los extractos de Yucca filifera también causaron inhibición en el desarrollo de los hongos. Con extracto etanólico la inhibición de Rhizopus sp. en el micelio y esporulación fue de 100 % con la dosis de 4000 ppm, en Colletotrichum sp. de 35 y 99.1 % y Penicillium sp. en 80 y 93.6 % en la dosis de 5000 ppm y con extracto hexánico la inhibición del micelio de Rhizopus sp. fue de 100 % en 4000 ppm y esporulación 3000 ppm, en Colletotrichum sp. la inhibición del micelio y esporulación fue de 66.7 y 51.2 %, en Penicillium sp. de 40 y 54 % con la dosis de 5000 ppm. La segunda parte de este trabajo, evaluación in vivo, consistió en la aplicación de cubiertas de cera de candelilla en emulsión y agua en solución con extractos hexánico y etanólico de Lippia graveolens, los dos mejores extractos de la primera prueba, en manzana y tomate. La cera de candelilla fue formulada por la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Autónoma de Coahuila y los frutos se compraron en huertos y supermercados locales. Los tratamientos fueron: a) cera de candelilla, b) extracto hexánico de L. graveolens en emulsión con cera de candelilla, c) extracto etanólico de L. graveolens en emulsión con cera de candelilla, d) extracto hexánico en solución con agua, e) extracto etanólico de L. graveolens en solución con agua y f) testigo. En la prueba in vivo con inoculación de patógenos se evaluaron los tratamientos antes mencionados sobre los frutos distribuidos de la siguiente manera: a) frutos con lesión e inoculados antes de aplicar la cubierta, b) frutos con lesión e inoculados después de aplicar la cubierta c) frutos sin lesión con la cubierta e inoculados y d) testigos: frutos con lesión e inoculados y frutos sin lesión e inoculados. Las variables evaluadas fueron: pérdida de peso, cambio de color, firmeza, pH, azúcares totales y ºBrix. Los resultados se presentaron en formas muy diversas para los diferentes tratamientos: la pérdida de color en el testigo fue mas rápida que en el resto de los tratamientos donde el cambio de color fue de forma gradual sin perder el color amarillo. La disminución en la pérdida de peso y firmeza fueron considerables con el extracto hexánico de L. graveolens en agua, para ambos frutos. Para las variables de azúcares totales, ºBrix y pH, se indico que no hubo efecto considerable en los procesos fisiológicos de los frutos. Aunque cabe señalar, que la producción de azucares fue disminuida por el efecto de las cubiertas. En las pruebas de patogenicidad para tomates no lesionados e inoculados con Rhizopus sp., no enfermaron, pero si los lesionados e inoculados antes y después de poner la cubierta. El extracto etanólico de L. graveolens no permitió el desarrollo de Rhizopus sp. en manzanas inoculadas y sin lesión, pero en el testigo las manzanas con lesión enfermaron rápidamente así como en el tratamiento con cera de candelilla y extracto hexánico en agua. Las manzanas lesionadas e inoculadas antes y después de la aplicación de la cubierta se enfermaron; las manzanas lesionadas antes de la aplicación de la cubierta con extracto etanólico también. Los frutos lesionados después de aplicar la cubierta de los extractos etanólico y hexánico con cera de candelilla lograron resistir al desarrollo del patógeno manteniendo sin enfermedad a todas las manzanas lesionadas y no lesionadas al mismo tiempo que el testigo. En las pruebas con Penicillium sp. las manzanas de todos los tratamientos inoculadas pero no lesionadas no enfermaron en contraste con todas las manzanas lesionadas antes y después de aplicar la cubierta de todos los tratamientos que si enfermaron al mismo tiempo que el testigo"

"The present work was made in two parts; the first one was the in vitro inhibition test of the studied fungi. The second one was made in vivo with the application of the best extracts from the first test in emulsion candelilla wax and water were used as fruit coatings to evaluate the shelf life with and without inoculum of the studied fungi. Leaves of the Lippia graveolens, Yucca filifera, Yucca carnerosana and Agave lechuguilla collected in the chihuahuan desert in the southeast of the state of Coahuila, were used. Ethanol and hexane, solvents of different polarity, were used to obtain the extracts of the plants, this extracts were individually mixed in PDA medium and poured in Petri dishes, using doses of 0, 500, 1000, 2000, 3000, 4000 y 5000 ppm then, they were inoculated with monosporic strains of Colletotrichum sp. Penicillium sp. y Rhizopus sp. The variables evaluated were: mycelial growth and number of spores. All extracts caused inhibition in the development of the mycelium and quantity of spores. But only the total inhibition was considered with the lowest dosis, it means that the lowest dosis that inhibited in 100 % the development of the studied fungi, was used in in vivo test of coating of fruits. The ethanolic and hexanic extracts of L. graveolens inhibited the mycelial and sporulation development in 100 % of Rhizopus sp. the Colletotrichum sp. in 500 ppm but the mycelium of Penicillium sp. in 3000 ppm and the spores in 2000 ppm. The ethanolic extract of Agave lechuguilla inhibited in 37% the mycelium in Rhizopus sp. and sporulation in 77.1 % in the doses of 5000 ppm. In Colletotrichum sp. the inhibition of the mycelium and the sporulation was of 100 % in the doses of 500 ppm and in the penicillim sp. The inhibition of the mycelium was of 84 % and sporulation of 52.6 % in 5000 ppm. With the hexanic extract of A. lechuguilla the inhibition in the sporulation of Rhizopus sp. was of 100 % in the doses of 500 and 3000 ppm in the mycelium. In Colletotrichum sp. the inhibition was of 91.1 % to the mycelium and 99.7 % to sporulation in the doses of 5000 ppm and in Penicillium sp. the inhibition was 84 and 90.5 % with 5000 ppm. The inhibition caused by the ethanolic extract of carnerosana on Rhizopus sp. was of 40 % to the mycelium and 30.8 % in the sporulation, to Colletotrichum sp. 55 % in the doses of 5000 ppm and with the hexanic extract the inhibition of mycelium and sporulation in Rhizopus sp. was of 100 % with 3000 ppm, in Colletotrichum sp. 28.9 and 65.5 % and to Penicillium sp. 44 and 61.6 % in the doses of 5000 ppm. The Yucca filifera extracts also caused inhibition in the development of the fungi. With ethanolic extract, the inhibition of Rhizopus sp. in the mycelium and sporulation was of 100 % with the doses of 4000 ppm in Colletotrichum sp. of 35 and 99.1 % and Penicillium sp. in 80 and 93.6 % in the doses of 5000 ppm and with hexanic extract the inhibition of mycelium of Rhizopus sp. was of 100 % in 4000 ppm and sporulation 3000 ppm in Colletotrichum sp. the inhibition of mycelium and sporulation was of 66.7 and 51.2 % and in Penicillium sp. of 40 and 54 % with the doses of 5000 ppm. The second part of this work was the evaluation in vivo, consisted in the application of coating of the candelilla wax in emulsion and water in solution, and with hexanic and ethanolic extracts of Lippia graveolens, the two best extracts from the first test, on apples and tomatoes. The candelilla wax was formulated by researchers of the Faculty of Chemical Sciences of the University Autonomy of Coahuila and the fruits were bought in local orchards and local supermarkets. The treatments were: a) candelilla wax, b) L. graveolens hexanic extract in emulsion with candelilla wax, d) hexanic extract in solution with water, e) L. graveolens ethanolic extract in solution with water and f) witness. In the in vivo test with inoculation of pathogens above mentioned were evaluated on the fruits distributed as follows: a) fruits with injury and inoculated before the application of coating, b) fruits with injury, c) fruits without injury with the coating and inoculated and d) witnesses: fruits with injury and inoculated and fruits without injury and inoculated. The variables evaluated were: weight loss, color change, firmness, pH, total sugars, ºBrix. The results were presented in many forms for different treatments: the loss of color in the witness was faster than in the rest of the treatments where the color change was gradually without losing the yellow. The decrease in weight loss and firmness were significant with the L. graveolens hexanic extract in water for both fruits. For the variables of total sugars, ºBrix and pH, indicated that there was no indicated effect on the physiological processes of fruit. However, the sugar production was reduced by the coatings effect. The pathogenicity test, the tomatoes without injured and inoculated with Rhizopus sp. did not decay, but the tomatoes injured and inoculated decayed before and after putting the coating. The L. graveolens ethanolic extract did not allow the development of Rhizopus sp. In inoculated apples and without injury, but the witness apples with injury decay quickly as well as in treatment of candelilla wax and hexanic extract in water. Injured and inoculated apple decayed before and after the application of the coating; injured apples also decayed before the application of ethanolic extract. The injured fruits after applying ethanolic and hexanic extracts with candelilla wax coating achieve to resist the development of pathogens keeping all the injured and not injured apples without decay at the same time as the witness. In the test where Penicillium sp. was used, every inoculated but noy injured apple did not decay, in contrast with the injured apples that decayed at the same time as the witness before and after the application of the coating in all the treatments"

Master thesis

Hongos Candelilla CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Efecto de factores abióticos en la expresiónde genes de la biosíntesis de aflatoxinas y ocratoxinas en hongos aislados de café

ANDREA ALEJANDRA ARRÚA ALVARENGA (2012)

"México es el octavo productor mundial de café; el gasto en hogares en café y derivados es de unos 4000 millones de pesos anualmente. El 90% de la producción está concentrada en Chiapas (38.8%), Veracruz (22.6%), Puebla (17.3%) y Oaxaca (11.4%). Entre los años 2008/9las exportaciones subieron un 8.6% y las mismas van dirigidas principalmente a USA, Bélgica, Alemania, Japón y Canadá. Los sustratos alimenticios, se encuentran expuestos al ataque de hongos, entre ellos los que producen micotoxinas. Las micotoxinas son metabolitos secundarios producidos por ciertas especies de hongos, que tienen efectos negativos en la salud del hombre y los animales. Son neuro y nefro tóxicas, oncogénicas y teratogénicas, además, producen daño pulmonar y hepático. Las principales micotoxinas presentes en el cultivo del café son la ocratoxina A(OTA), las aflatoxinas, (AF) y la patulina (PAT). Existen factores que condicionan la producción de micotoxinas, siendo los principales la temperatura y la actividad del agua, tanto para el desarrollo del hongo como para la producción de la toxina, el pH condiciona la respuesta del hongo a estos factores. La síntesis de las AF ha sido bien estudiada y se conocen los genes implicados en su biosíntesis siendo, los más importantes nor-1; ver-1;omt-A y aflR. Para las OTA: PKSs. La vía de síntesis de OTA en los Aspergilluses prácticamente desconocida. En cuanto a los factores que afectan la expresión de esos genes, muy poco se ha estudiado aún. Es por estas razones que se planteó verificar el efecto de los factores abióticos sobre la expresión de genes de la biosíntesis de OTA y AF en hongos del género Aspergillus de las Secciones Flavi y Nigri aislados de café. Se tomaron 25 muestras compuestas de 250 gramos cada una de la cosecha del día de café cereza de dos localidades en el estado de Veracruz, en Teocelo e Ixhuatlán del Café; el primero con manejo convencional, el segundo con manejo orgánico, ambos de la variedad Oro Azteca. Se realizó el proceso de beneficiado húmedo de las mismas y se obtuvieron xiv micobiotas en las etapas de café cereza, posterior al proceso de fermentación, a los 6 días del proceso de secado, a finalizar el proceso de secado, en café pergamino, oro y tostado; paralelamente se realizaron micobiotas en tres marcas de cafés comerciales reconocidas. Para la identificación se realizó la observación de características morfológicas macro y microscópicas en medios diferenciales. Se calculó la incidencia por medio de la frecuencia absoluta y la densidad relativa de los hongos presentes. Se detectaron hongos de los géneros Acremonium sp., Alternaria sp., Aspergillus sp., Cladosporium sp., Colletotrichum sp., Fusarium spp., Geotrichum sp., Penicillium sp., Rhizoctonia sp., Rhizopus sp.y Stemphillium sp.. En el café manejado orgánicamente se detectó una mayor incidencia de hongos del género Aspergillusa lo largo del proceso del beneficio. Los hongos pertenecientes al género Aspergillusfueron purificados; por medio de diluciones se realizaron cultivos monospóricos y se procedió a la identificación de los mismos por medio de claves taxonómicas mediante el uso de medios diferenciales a temperaturas pre establecidas. Se pre seleccionaron dos cepas, una de Aspergillus Sección Flavi, cepa 51, de café oro y la cepa 23 de Aspergillus Sección Nigri, de café pergamino; se tomó también como testigo una cepa de Aspergillus flavus, de referencia proveída por la Unidad de Investigación en Granos y Semillas, UNIGRAS de la Universidad Nacional Autónoma de México, UNAM. Se realizó la reconfirmación de la identidad de las cepas pre seleccionadas y posteriormente se caracterizaron molecularmente las rutas de biosíntesis de AF y OTA presentes en las mismas. En la cepa 51 se detectó la presencia de los genes estructurales nor-1, ver-1, omt-A y el activador de la transcripción aflR, de la vía de síntesis de las AF. En la cepa 23, se detectó la presencia de los genes Acarp450 y AckS9 de la vía de síntesis de las OTA, por lo cual se consideró que las cepas pre seleccionas son potencialmente productoras de xv toxinas. A continuación, se determinaron el efecto del pH y de la actividad del agua sobre la expresión de los genes aflR de la biosíntesis de las AF y Acarp450 de la biosíntesis de las OTA. Los rangos de pH considerados en el experimento variaron de 4.5 a 13.5 para la cepa 51 y de Referencia UNAM y de 4.5 a 11.5 en la cepa 23. A las 72 horas de crecimiento se activó la vía de síntesis de las AF en los testigos, tanto de la cepa Referencia como la 51 de café, a pH 7 y aw 99 y bajo la condición pH 4.5 y aw 0.99 en la cepa 51. A partir de las 48 horas de crecimiento se activó la vía de síntesis de las OTA en la cepa de A. Sección Nigri pre seleccionada bajo todas las condiciones propuestas en el experimento."

"Mexico is the eighth largest producer of coffee, household spending on coffee and derivatives is about 4000 million dollars annually. 90% of production is concentrated in Chiapas (38.8%), Veracruz (22.6%), Puebla (17.3%) and Oaxaca (11.4%). Between 2008/9 exports increased in 8.6% and the same are intended mainly to USA, Belgium, Germany, Japan and Canada. Foodsubstratesare exposedto attack byfungi, including those that producetoxins. Mycotoxins are secondary metabolites produced by certain species of fungi, which have negative effects on human health and animals. Are neuro and nephro toxic, oncogenic, teratogenic, cause lung damage and liver. The main mycotoxins in coffee cultivation are the ochratoxin A (OTA), the aflatoxins (AF) and patuline (PAT). Factors that influence the production of mycotoxins, are temperature and water activity for both fungal growth and for the production of the toxin, the pH affects the response of the fungus to these factors. The synthesis of aflatoxins has been well studied and known genes involved in its biosynthesis being the most important nor-1, ver-1, omt-A and aflR; for Ochratoxins: PKSs. The synthesis of OTA inAspergillus is virtually unknown. As for the factors affecting the expression of these genes, very little has been studied yet. It is for these reasons that arose check the effect of abiotic factors on the expression of genes for the production of OTA and AF fungi Aspergillus Section Flavi and Nigri isolated from coffee, for which, 25 composite samples were taken 250 grams each one, of the day's harvest of coffee cherries of two points in the state of Veracruz, Ixhuatlán Teocelo and Coffee, the first with conventional management, the second organic management, both of Aztec Gold. We performed the wet milling process and conducted them in stages micobiotas coffee cherry, after fermentation, after 6 days of the drying process, to terminate the process of drying, parchment, gold and toastedmicobiotas were performed in parallel in three coffee xii trademarks recognized. To identify the observation was made morphologic features macro and microscopic differential media. The incidence was calculated by means of the absolute frequency and relative density of the fungi present. Fungi were detected in the genera Acremonium sp., Alternaria sp., Aspergillus sp., Cladosporium sp., Colletotrichum sp., Fusarium spp., Geotrichum sp., Penicillium sp., Rhizoctonia sp., Rhizopus sp. and Stemphillium sp.. In organically managed coffee had a higher incidence of Aspergillus fungi during the process of profit. Fungi belonging to the genus Aspergilluswere purified; by half of dilutions were performed monosporic cultures and we proceeded to the identification of them through taxonomic keys by using differential media at temperatures pre established. Two strains were pre selected, a Section FlaviAspergillus strain 51, of green coffee and the strain of Aspergillus Section Nigri 23, of parchment, also as a witness took a strain of Aspergillus flavus, reference provided by the Unidad de Investigación en Granos y Semillas, UNIGRAS National Autonomous University of Mexico, UNAM. Was performed the reconfirmation of the identity of the strains pre selected and subsequently were molecularly characterized biosynthetic routes AF and OTA present in the same. In strain 51 was detected the presence of the structural genes nor-1, ver-1, omt-A and activator of transcription aflR, the route of synthesis of the AF. In strain 23, was detected the presence of genes Acarp450 and AckS9 of route of synthesis of the OTA, for which it was considered that pre select strains are potentially producing toxins. Were determinedthe effect of pH and water activity on the expression of genes aflR of the biosynthesis of AF and Acarp450 of the biosynthesis of the OTA. pH ranges considered in the experiment ranged from 4.5 to 13.5 for strain 51 and Reference UNAM and 4.5 to 11.5 in strain 23. At 72 hours of growth was activated synthesis pathway FAs in the witnesses, both of the strain xiii reference as the 51 of coffee, at pH 7 and aw 99; and under the condition pH 4.5 and aw 0.99 in the strain 51. From 48 hours of growth was activated route of synthesis of OTA in strain of A. Section Nigri pre selected under all conditions proposed in the experiment."

Doctoral thesis

Café Hongos Plantas Enfermedades CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Evaluación de hongos entomopatógenos y sus formulaciones contra el psílido asiático de los cítricos diaphorina citri (kwayama)

REBECA CASIQUE VALDÉS (2011)

" El Huanglongbing es una enfermedad de reciente introducción a México transmitida por el psílido Asiático de los cítricos Diaphorina citri la cual no tiene cura y los árboles infectados mueren en el transcurso de algunos años. Debido a los efectos nocivos que provocan los insecticidas, el control del vector con hongos entomopatógenos (HE) puede ser una alternativa eficaz para atacar el problema; para ello, se aislaron cepas de HE de suelo de la zona citrícola de Nuevo León y Tamaulipas, México y de psílidos micosados de D. citri, éstos últimos se identificaron con Primers de la subunidad ribosomal D1D2. La efectividad de 46 cepas y blastosporas de HE en la mortalidad de ninfas y adultos de D. citri se evaluó a 1x107 esporas/ml en Tween 20 a 0.025% (T20). Aceite mineral agrícola en emulsión con agua y T20 se probaron en aplicaciones de HE en una huerta de naranjos en Martinez de la Torre Veracruz, México, la infección por HE se evaluó en ninfas de D. citri después de 72 horas de exposición en campo con %HR bajo y altas temperaturas. 11 cepas de Beauveria bassiana y 16 de Metarhizium anisopliae se aislaron de suelo; 5 Hirsutella citriformis, 4 Lecanicillium lecanii, 2 Torrubiella spp y 10 Isaria fumosorosea de psílidos micosados. El análisis de varianza mostró diferencias altamente significativas entre la mortalidad de ninfas de D. citri evaluando 46 cepas de HE y el testigo. Las mejores cepas infectivas fueron de B. bassiana (B6C, B5C), M. anisopliae (3M8, 6M11) e I. fumosorosea (IF8B19) presentando >90% de mortalidad. No hay diferencia significativa en % de infección en ninfas inducido por cepas B6C, 6M11, IF8B19 en campo, pero si diferencia altamente significativa respecto al testigo (P=4.2x10-10), en la interacción hongo-formulación se aprecian diferencias significativas (P=0.04167). B6C como factor, indujo más del 69% de infección en ninfas; IF8B19 trabajó mejor con T20 (60%) que en aceite (31%); B6C indujo los valores más altos de infección de más del 80% aplicado en emulsión de aceite en agua. De acuerdo a los resultados, la aplicación de HE en formulaciones es una alternativa prometedora de control biológico de D. citri"

The Huanglongbing is a disease recently introduced to Mexico transmitted by the Asian citrus psyllid Diaphorina citri which has no cure, and infected trees die within a few years. Due to the adverse effects caused by insecticides, vector control with entomopathogenic fungi (EF) can be an effective alternative to combat the problem. For this, we isolated EF strains from soil of the citrus area of Nuevo Leon and Tamaulipas, viii Mexico and from mycosed psyllids of D. citri these were identified using primers of the ribosomal subunit D1D2. The effectiveness of 46 strains and blastospores of EF in the mortality of nymphs and adults of D. citri was evaluated at 1x107 spores/ml in 0.025% Tween 20 (T20). Agricultural mineral oil in water emulsion and T20 were tested in applications of EF in an orchard of orange trees in Martinez de la Torre Veracruz, Mexico; EF infection was evaluated in nymphs of D. citri after 72 hours of exposure in the field with % RH low and high temperatures. 11 strains of Beauveria bassiana and 16 of Metarhizium anisopliae were isolated from soil and 5 Hirsutella citriformis, 4 Lecanicillium lecanii, 2 Torrubiella spp., 10 Isaria fumosorosea from mycosed psyllids. The analysis of variance showed highly significant differences between the mortality of nymphs of D. citri of 46 evaluated strains of EF and the control. The best infective strains were B. bassiana (B6C, B5C), M. anisopliae (3M8, 6M11) and I. fumosorosea (IF8B19) presenting> 90% mortality. No significant differences in % of infection in nymphs induced by strains B6C, 6M11, IF8B19 in the field, but highly significant difference compared with the control (P=4.2x10-10), in the fungus-formulation interaction are significant differences (P=0.04167 ). B6C as factor, induced more than 69% infection in nymphs; IF8B19 worked better with T20 (60%) than oil (31%) B6C induced the highest values of infection (more than 80%) in oil emulsion water. According to the results, the application of EF in formulations is a promising alternative for biological control of D. citri.

Master thesis

Hongos Entomopatógenos Formulaciones, HLB CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Estudio de microorganismos resistentes a arsénico obtenidos del metagenoma de suelos del Estado de Guanajuato

MARIA ELENA LOPEZ PEREZ (2020)

El arsénico (As) es un elemento traza presente en diferentes ecosistemas. La exposición aguda y crónica al As representa un riesgo para el medio ambiente y la salud humana ya que se ha clasificado como uno de los metaloides más tóxicos y cancerígenos conocidos. La dosis letal mínima en seres humanos se sitúa en el rango de 1 a 3 mg kg-1. La contaminación por As en el estado de Guanajuato ha ganado más atención en los últimos años, principalmente por los altos contenidos de As en las aguas subterráneas utilizadas para riego, que pueden acumular el As en el suelo y así ser transferido a la cadena alimentaria. También Guanajuato al ser un estado con historia de explotación minera desde el siglo XVI (principalmente para la extracción de Au y Ag), presenta suelos con relaves mineros dispersos que son una fuente de contaminación de As...Por lo tanto, en este estudio, se identificaron molecularmente aislados microbianos resistentes a As y se analizaron por su capacidad para óxido-reducir As. Asimismo, fueron identificados genes de resistencia a As en bacterias (aoxB, arrA, arsB, ACR3(1) y ACR3(2)), y se cuantificó el As en el medio de cultivo donde se inocularon los microorganismos. Los géneros Bacillus y Penicillium aislados de suelo SMI fueron capaces de crecer en concentraciones de As de hasta 30 mM, redujeron As (V) a As (III) y eliminaron As a tasas de 9.8% y 12.1%, respectivamente. Se identificó el gen arsB en Bacillus sp., B. simplex y B. megaterium... Se comprueba que los suelos altamente contaminados con As tienen una menor diversidad microbiana, pero un mayor número de microorganismos capaces de la biotransformación de este metaloide. Las bacterias y hongos encontrados en este trabajo pueden mostrar potencial para ser utilizados como agentes de biorremediación en suelos contaminados.

Doctoral thesis

CIS- Doctorado en Biociencias CIENCIAS FÍSICO MATEMÁTICAS Y CIENCIAS DE LA TIERRA CIENCIAS DE LA TIERRA Y DEL ESPACIO CIENCIAS DEL SUELO (EDAFOLOGÍA) Suelos – Guanajuato (Estado) Suelos Agrícolas Suelos Mineros Arsénico Bacterias Hongos Soils - Guanajuato (State) Agricultural soils Mining soils Arsenic Bacteria Fungi

Hongos portados internamente y la calidad de la semilla de frijol (phaseolus vulgaris l.) producida en el Norte de Zacatecas

LUIS ROMÁN CASTAÑEDA VIESCA (1996)

"Esta investigación se realizó con el propósito de evaluar la calidad de la semilla de frijol en variedades criollas y mejoradas con coloración contrastante de testa, ante el problema de la transmisión interna de hongos patógenos, comparando las propiedades fisicas, biológicas y sanitarias de las mismas, antes y después de un ciclo agrícola en la zona temporalera de Río Grande, Zac. Se cuantificaron y determinaron los hongos portados internamente por la semilla de frijol, tanto certificada como criolla, observándose que no existe una relación directa entre el número y tipo de hongos y la calidad fisiológica de la semilla ensayada. Tampoco se observó ningún efecto de la coloración de la testa de la semilla sobre el vigor y la resistencia a los hongos transmitidos internamente"

"The purpose of this research was to evaluate the quality of bean seed ofnative and improved origin with emphasis on coat coloration. The main objetive was to compare physical, biologycal and sanitary properties of light and dark colores seeds before and alter an agricultural cycle in the region of Río Grande, Zac. to test for internal transmission ofpathogenic fungi. Seed borne fungi were determined and quantified in native and improved seeds. There was not a direct relation between the number and type of fungi and the physiological quality of the test seeds. No aparent effect was observed of the seed coating coloration on the vigour and seed borne fungi resistence"

Master thesis

Frijol Semillas Hongos Calidad CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA