Efecto del estrés hídrico sobre el contenido de inulina y otros carbohidratos en dalia (Dahlia sp)

Patricia Dupre (2013)

Los fructanos son polímeros de fructosa que son derivados de la sacarosa, se sintetizan mediante la acción de fructosiltransferasas, enzimas encargadas de transferir radicales fructosilo para formar diferentes enlaces. En las plantas, los fructanos son carbohidratos de reserva y podrían estar involucrados en la tolerancia al estrés hídrico. Se estima que únicamente el 15 % de las Angiospermas pueden producirlos. La dalia pertenece a la familia Asteraceae y tiene la capacidad de producir un fructano con enlaces lineales del tipo ß (2-1): la inulina. En el presente estudio se investigó el efecto del estrés hídrico durante 9 días sobre el contenido de inulina y otros carbohidratos relacionados con su síntesis en dalia. Para ello se expusieron las plantas, bajo condiciones in-vitro, a un estrés hídrico causado por la adición de PEG 8000 a diferentes concentraciones en los medios de cultivo. El estatus hídrico de las plantas a lo largo del experimento fue evaluado mediante mediciones del contenido relativo de agua (CRA). Se encontró que en presencia de PEG a 20 y 30% el contenido de inulina y glucosa aumenta, el contenido de sacarosa presenta un aumento aunque no es significativo y el contenido de fructosa permanece inalterado. Se concluye que un estrés hídrico provocado por PEG modifica el metabolismo de la

inulina en dalia.

Conference proceedings

Fructano; PEG; dalia; cultivo in vitro CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Inducción de proembriones somáticos en ave del paraíso (Strelitzia reginae Banks)

AMAURY MARTIN ARZATE FERNANDEZ JOSE LUIS PIÑA ESCUTIA HILDA ARACELI ZAVALETA MANCERA (2008)

El ave del paraíso (Strelitzia reginae Banks) es una planta ornamental que por su belleza es altamente cotizada como flor de corte. Se propaga por semilla y por división de matas, aunque ambos métodos son muy lentos. La multiplicación de plantas in vitro vía embriogénesis somática, ha sido exitosamente establecida en muchas especies ornamentales. Para S. reginae no existen reportes de su propagación mediante dicho proceso ya que presenta serios problemas de oscurecimiento de los explantes cultivados. En este trabajo se estableció un procedimiento para la inducción de proembriones somáticos (PES) a partir de fragmentos (explantes) del nudo cotiledonar de plántulas de 30 d de edad. A los cinco meses de incubación, los explantes cultivados en oscuridad produjeron PES en el medio Murashige y Skoog a 100 % y 50 % de su concentración, suplementado con 2,4-D (0.5 a 2.0 mg L-1), sacarosa (30 g L-1) y carbón activado (0.1 g L-1). Los PES crecieron y formaron estructuras de 5 a 6 mm de longitud, cuyo extremo distal presentó una organización celular comparable a la de un meristemo de raíz pero sin centro quiescente. Los cortes histológicos no evidenciaron la presencia de un meristemo apical de brote, lo cual pudo haber causado que los proembriones in vitro no completaran su desarrollo.

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Biología Strelitzia reginae BIOLOGÍA Y QUÍMICA 4-D cultivo in vitro proembrión somático callo embriogénico BIOLOGÍA Y QUÍMICA

Un protocolo de embriogénesis somática para la regeneración y caracterización in vitro de Laelia Anceps Ssp. Dawsonii

Hilda Eulalia Lee Espinosa ANTONIO LAGUNA CERDA Joaquín Murguía González Lourdes Georgina Iglesias Andreu BENJAMIN GARCIA ROSAS DIANA ESCOBEDO LOPEZ YOLANDA MARIA MARTINEZ OCAMPO FELIPE ALONSO BARREDO POOL (2010)

Laelia anceps subespecie dawsonii, es una de las orquídeas silvestres mexicanas más apreciadas, con potencial ornamental por sus atractivas características que le permiten cumplir estándares internacionales de calidad y la convierten en una especie económicamente importante. Ello ha provocado su colecta excesiva y el consecuente riesgo de extinción. Para asegurar su conservación, es necesario desarrollar protocolos eficientes de propagación para esta especie, que permitan su uso sustentable y reduzcan la colecta. La embriogénesis somática constituye una tecnología eficiente para la multiplicación in vitro de especies vegetales. En este estudio, se evaluaron las condiciones in vitro para desarrollar un protocolo de embriogénesis somática para Laelia anceps ssp. dawsonii. A partir de semillas se indujo callo embriogénico en el medio Murashige y Skoog suplementado con ácido naftalénacético (ANA), 6-bencilami-nopurina (BAP), cinetina (Kin) y ácido indol acético (AIA), en combinaciones múltiples. La combinación ANA+BAP+AIA (2 mg L-1 de cada una) resultó óptima para inducción de callo pues produjo 611 embriones somáticos en fotoperiodo de 16 h (33.8 ¿mol m-2 s-1), con tres subcultivos a intervalos de 45 d en el mismo medio de cultivo, en el que además los embriones desarrollaron plántulas completas. En aproximadamente tres meses, las plántulas alcanzaron 4 a 5 cm en el medio Vacin y Went suplementado con BAP (2 mg L-1), AIA (1 mg L-1) y carbón activado (0.2 %), y después de 30 d, se aclimataron en invernadero, con 95 % de sobrevivencia.

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Biología Laelia anceps ssp dawsonii Cultivo in vitro Embriogénesis somática Orchidaceae CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Micropropagación de Cissus tiliacea, planta del sur del estado de México

José Humberto Jiménez Martínez ANDRES GONZALEZ HUERTA OMAR FRANCO MORA ALVARO CASTAÑEDA VILDOZOLA María de Guadalupe Gutiérrez Martínez (2011)

Se micropropagó Cissus tiliace, recurso fitogenético con potencial agronómico y farmacológico, en los medios de cultivo Murashige-Skoog (MS) y Lloyd y McCown (WPM). En ambos medios se generaron resultados similares para número de brotes, nudos, hojas y raíces adventicias, sólo existió diferencia significativa (p 0,05) en la formación de callo. Para la multiplicación in vitro se utilizó WPM adicionado con 0; 0,5; 1,0; 1,5 ó 2,0 mg L-1de benciladenina (BA) y se emplearon tres tipos de segmentos nodales (basal, medio y apical). Las concentraciones de 0 y 0,5 mg L-1 de BA resultaron en un mayor tamaño y desarrollo del explante, además permitieron la formación de 1,2 a 1,6raíces por explante. Las concentraciones de 1,5 y 2,0mg L-1 de BA indujeron la formación de callo. No existió diferencia significativa en las variables evaluadas por efecto del tipo de segmento nodal establecido in vitro. En el enraizamiento, en el medio MS, se evaluaron tres tipos de auxinas: ácido naftalen-1-acético (ANA), ácido indol-3-butírico (AIB) y ácido indol-3-acético (AIA) a 0,5 mg L-1; el mayor número de raíces secundarias y diámetro de la raíz principal fue inducido por ANA, sin embargo AIB indujo una mayor elongación de la raíz principal. Los resultados del presente trabajo sugieren que el cultivo invitro de C. tiliacea es una alternativa para su conservación y multiplicación.

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Agrociencias Conservación cultivo in vitro recursos genéticos segmento nodal Vitaceae CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

OBTENCIÓN DE CEPAS Y PRODUCCIÓN DE INÓCULO DE CINCO ESPECIES DE HONGOS SILVESTRES COMESTIBLES DE ALTA MONTAÑA EN EL CENTRO DE MÉXICO

YOLANDA ARANA GABRIEL CRISTINA BURROLA AGUILAR SERGIO FRANCO MAASS (2014)

Se obtuvieron cepas de Psathyrella spadicea , Floccularia aff. luteovirens , Clitocybe squamulosa , Flammulina mexicana y Lyophyllum aff. shimeji , cuyos esporomas son recolectados y consumi - dos por habitantes del Nevado de Toluca, México. Las cepas se estudiaron in vitro en seis medios de cultivo (ACP: Agar croquetas de perro, AM: Agar maíz, PDA-PL: Agar papa dextrosa-pepto - na y levadura, EMA-PL: Agar extracto de malta-peptona y levadura, PDA y EMA) a 18 °C y 25 °C. Las especies se desarrollaron satisfactoriamente a 18 °C , siendo F. mexicana y L . aff. shimeji las que tuvieron mayor velocidad de crecimiento y producción de biomasa. Flammulina mexicana solo se desarrolló a 18 °C, presentando mayor crecimiento y producción de biomasa en ACP. La cepa de L. aff. shimeji creció a 18 y 25 °C, la mayor velocidad de crecimiento se registró en medio PDA a 18 °C y la mayor producción de biomasa en EMA-PL a 18 °C. Considerando las mejores condiciones para el desarrollo de micelio in vitro, se produjo inóculo primario de F. mexicana y L . aff. shimeji en trigo y sorgo. La mayor densidad del micelio y porcentaje de grano cubierto se obtuvieron con el sustrato de trigo.

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Agrociencias Cultivo in vitro aislamiento vegetativo producción de biomasa velocidad de crecimiento Flammulina mexicana Lyophyllum aff shimeji CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Establecimiento de cultivos in vitro de bromelia karatas l;Y su análisis fitoquímico preliminar

FANNY JOSEFINA ALBARRAN MONDRAGON (2016)

Se establecieron cultivos in vitro de Bromelia karatas con capacidad de síntesis de compuestos fenólicos.

Bromelia karatas L “Timbiriche” es una especie utilizada como cerco vivo, en la elaboración de bebidas refrescantes y coadyuvante contra la diabetes. El objetivo del presente trabajo fue establecer cultivos in vitro de B. karatas y analizar el contenido de fenoles totales. Para el establecimiento de cultivos in vitro, semillas y explantes foliares fueron desinfectadas y sembradas en mediode cultivo Murashige y Skoog (MS) suplementado con diferentes reguladores del crecimiento vegetal (RCV): 6-bencilaminopurina (BAP), ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2.4-D) y tidiazurón (TDZ) bajo diferentes concentraciones. Se logró establecer el cultivo aséptico de semillas y hojas, así como la germinación bajo diferentes tratamientos de escarificación (66.25-100%). Las semillas sembradas en medio MS conteniendo 2 mg/L de 2,4-D con 1.0 mg/L de BAP formaron callo (78.57%), de apariencia compacta, verdey organogénico. Por otro lado, plántulas germinadas in vitro sirvieron como fuente de explantes foliares que se sembraron en medio para inducción de callo. Así mismo se determinó el contenido de fenoles totales por espectrofotometría UV-Vis, empleando como material de referencia el ácido gálico en diferentes tejidos derivados de los cultivos in vitro y especímenes adultos (frutos inmaduros, frutos maduros, hojas y callo). El material vegetal fue secado en estufa o por liofilización. Posteriormente, de la biomasa se obtuvieron extractos metanólicos por ultrasonicación (53 kHz, 40°C y 1 h) siendo el fruto maduro el tejido que significativamente mayor contenido de fenoles totales presentó (1110 mg EAG/100g biomasa PS). Estos compuestos son ampliamente conocidos por sus propiedades antioxidantes, útiles en la prevención y/o coadyuvantes de múltiples enfermedades asociadas a losprocesos oxidativos. Los resultados proporcionan información para la aproximación en el uso de éste fruto en la medicina tradicional contra la diabetes dando alternativas de cultivos que permitan utilizar y conservar dicho recurso de manera sustentable.

Financiamiento parcial a través del proyecto CONACyT de Ciencia Básica 167564.

Master thesis

bromelia karatas cultivo in vitro germinación CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Musgos cultivados, indicadores ambientales de contaminación atmosférica

MARIA DE LOS ANGELES GARCIA CHAVEZ ANA MARCELA GOMEZ HINOJOS NELSON AVONCE VERGARA GRACIELA ZARAZUA ORTEGA CARLOS EDUARDO BARRERA DIAZ (2016)

La contaminación atmosférica se ha asociado a diversas enfermedades respiratorias y cardiovasculares (Pan et al., 2015; Yang et al., 2015; Zhang et al., 2015). Es por ello que hoy en día la calidad del aire es un tema de gran interés, tanto en el aspecto ambiental como de salud (Zarazúa et al., 2013). Sin embargo, el monitoreo convencional de los contaminantes atmosféricos no siempre es posible debido a los costos generados por la adquisición y mantenimiento de los equipos tecnológicos necesarios (Ares et al., 2012; Barandovski et al.,2015). Para contrarrestar esta situación, se tiene como alternativa el uso de organismo biológicos como biomonitores de los contaminantes (Malizia et al., 2012; Salo, 2014;Stankovic et al., 2014).

Los musgos han demostrado ser muy útiles como bioindicadores de la contaminación del aire. El presente trabajo representa una alternativa a los tipos de monitoreo tradicionales (pasivo y activo), ya que propone evitar la extracción del musgo nativo de los sitios de monitoreo; en su lugar plantea el cultivo in vitro del musgo y su posterior exposición en los sitios de monitoreo. El protocolo incluye la identificación de la especie, obtención del esporofito con la cápsula cerrada, la esterilización de la cápsula de esporas con una solución de NaClO. Posteriormente la cápsula se rompe y se liberan las esporas en agua estéril, para ser dispersadas en medio BCD para su cultivo. La incubación de las esporas ocurre a temperatura e intensidad de luz controlada, condiciones que se mantienen constantes hasta que la planta produce gametofitos. Por este método se asegura la obtención de musgo no contaminado para su posterior exposición a la contaminación atmosférica. El biomonitoreo resulta ser un método relativamente económico y fácil de implementar, por lo que es una alternativa viable para ser desarrollada en lugares en donde no se cuente con la infraestructura para monitorear la calidad del aire.

Universidad Autónoma del Estado de México - CONACYT

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Bioindicador biomonitoreo calidad del aire cultivo in vitro BIOLOGÍA Y QUÍMICA

Establecimiento de cultivos in vitro de Galipea longiflora, una rutaceae de la Amazonia Boliviana

Establishment of in vitro cultures of Galipea longiflora, a rutaceae from Bolivian Amazonia

FELIPE AUGUSTO VAZQUEZ FLOTA Michel Sauvain (2007)

Galipea longiflora (Rutaceae) es una especie productora de alcaloides del tipo quinolínico, los cuales presentan una actividad antiparasitaria importante frente a cepas de Leishmania. Empleando técnicas de cultivo in vitro se ha logrado un cultivo en batch de esta especie amazónica. Se evaluaron diferentes tipos y concentraciones de fitorreguladores vegetales. La combinación 2,4-D (5 mg/L) y cinetina (0.1 mg/L) demostró ser muy eficiente para la inducción y producción de callos friables a partir de hojas. Los callos se emplearon como fuente de inoculo para establecer cultivos en suspensión celular, en medio liquido salino Murashige & Skoog y vitaminas del medio Gamborg’s B5 a 100 r.p.m. y 25 ºC en condiciones de oscuridad completa. En las suspensiones celulares se evaluaron la biomasa (peso fresco, peso seco) y la presencia de metabolitos secundarios (alcaloides), con la finalidad de caracterizar este cultivo en suspensión.

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ALCALOIDES QUINOLÍNICOS CULTIVO IN VITRO GALIPEA LONGIFLORA BIOLOGÍA Y QUÍMICA

Hongos micorrízicos ericoides y sus efectos en plantas de arándano azul (Vaccinium corymbosum L) cv BILOXI micropropagadas.

JORGE HUMBERTO LEÓN OSORIO (2017)

Tesis (Maestría en Ciencias, especialista en Fisiología Vegetal).- Colegio de Postgraduados, 2017.

Se realizó la búsqueda de hongos micorrízicos ericoides mediante aislamientos a partir de raíces de Vaccinium confertum HKB, de los aislamientos se identificó por métodos moleculares a Leptodontidium orchidicola, el cual se inoculó en el proceso de enraizamiento de microestacas de arándano azul Vaccinium corymbosum L. cv. Biloxi. Se desarrolló un protocolo para la obtención masiva de plantas de alta calidad fitosanitaria, por cultivo in vitro. La aplicación de 2iP ejerció un efecto favorable sobre la regeneración de brotes a partir de yemas axilares, así como el efecto de AIB en el proceso de enraizamiento de microestacas. A partir del aislamiento de hongos, se observó que L. orchidicola desarrolló un complejo de hifas dentro de las células de la epidermis de raíces de arándano azul, similar a los enrollamientos hifales típicos de la micorriza ericoide. La inoculación de este hongo también promovió el crecimiento radical y vegetativo; así como, la acumulación de mayor cantidad de biomasa en esta planta. Este es el primer reporte de L. corchidicola como endófito en raíces de V. confertum, y de su asociación con V. corymbosum. La inoculación de L. orchidicola podría utilizarse como herramienta biotecnológica importante para el enraizamiento plantas de arándano azul con alta calidad fitosanitaria, obtenidas por técnicas de cultivo in vitro utilizando el protocolo generado en esta investigación. _______________ ERICOID MYCORRHIZAL FUNGI AND EFFECTS ON MICROPROPAGATED BLUEBERRY (Vaccinium corymbosum L.) PLANTLETS, CV BILOXI. ABSTRACT: This research isolated potential ericoid mycorrhizal fungi from roots of Vaccinium confertum HKB, and Leptodontidium orchidicola was identified by means of molecular techniques and then, inoculated during the rooting of microcuttings of blueberry plants (Vaccinium corymbosum L. cv. Biloxi). First, an in vitro protocol was developed for the massive propagation of plantlets with high health quality. The application of 2iP had significant effects on shoot regeneration from axillary buds; the IBA also favored the rooting of microcuttings. Regarding fungi isolation, L. orchidicola developed hyphal complexes in epidermal cells resembling the typical hyphal coils of the ericoid mycorrhiza. The inoculation of this fungus resulted in improved vegetative and root growth, and plant biomass. Results provide the first report of L. corchidicola as an endophyte in roots of V. confertum, and as potential symbiont for V. corymbosum. The inoculation of L. orchidicola may be utilized as a biotecnhological tool for improving the rooting of blueberry plants obtained from the in vitro culture protocol developed in this research.

Master thesis

Cultivo in vitro Vaccinium Enraizamiento Hongos Leptodontidium Cenoccocum Micorriza ericoide Enrollamientos hifales In vitro culture Vaccinium Seed germination Rooting Fungi Ericoid mycorrhiza Hyphal coils Fisiología Vegetal Maestría CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA CIENCIAS AGRARIAS AGRONOMÍA BOTÁNICA GENERAL

Determinación de las condiciones básicas para el cultivo primario in vitro de células de manto de la madreperla Pinctada mazatlanica (Hanley, 1856)

ALEJANDRO OLIVERA BONILLA (2006)

El género Pinctada es utilizado en el perlicultivo comercial a nivel mundial. En este proceso, un fragmento de manto de la zona paleal de una ostra perlera (donador) es implantado en la gónada de otras ostras (receptores). Sin embargo el método para el cultivo de perlas esféricas es ineficiente. En el presente trabajo se realizó la búsqueda de métodos alternativos al perlicultivo: el cultivo in vitro del manto de P. mazatlanica. Por ello se realizó investigación preliminar dirigida a sentar las bases para el establecimiento de un cultivo primario in vitro de tejido y células del manto de la especie. La presente tesis tiene como objetivo determinar las condiciones básicas para llevar a cabo el cultivo in vitro de células aisladas y explantes del manto, evaluando cinco diferentes formas de disgregación enzimática celular, tres medios de cultivo para permitir la supervivencia de explantes, dos sustratos (con y sin poli-D-lisina) para las células y el manto, cuatro osmolaridades del medio de cultivo para el manto, además de la absorción de calcio del manto in vitro. Se obtuvo que la colagenasa (tipo I con una actividad específica de 414 U/mg) permitió los mejores rendimientos medidos como número de células viables disgregadas a 37°C por 60 minutos. La siembra de células disgregadas se dio mejor en el medio RPMI 1640, mantenido a 37°C con sustrato poli-D-lisina. El cultivo de explantes resultó ser mejor en el medio RPMI 1640 a 60 mM de NaCl, y en estas mismas condiciones se evidenció la absorción de calcio por medio de espectrofotometría de absorción atómica. Se puede concluir que los resultados preliminares generados en la presente investigación proporcionan un panorama claro del rumbo que deben seguir los futuros estudios dentro de este campo tan novedoso de la investigación científica y tecnológica. Se recomienda evaluar otras temperaturas, y utilizar el análisis digital de imágenes como método de cuantificación de procesos importantes como la absorción de calcio, así como realizar este tipo de estudios con la otra especie de ostra perlera mexicana Pteria sterna.

The genus Pinctada is used in commercial pearl farming worldwide. In this activity, a piece of mantle tissue from a donor’s paleal zone is implanted within the gonad of other receiver pearl oysters. However, this method has proved to be inefficient in commercial pearling activities. In the present thesis, the in vitro cultivation of mantle tissue from P. mazatlanica was evaluated as alternative method. Preliminary research was aimed for establishing the basis of a primary in vitro culture of cells and tissue of the species. The final goal was to culture cells and explants of the species, testing five methods of enzymatic dissociation, three different culture media, two cell substrates (with and without poly-D-lysine), four different osmolarities of the cell culture medium, as well as calcium intake by mantle tissue in vitro. Our results indicated that collagenase (type I with specific activity of 414 U/mg) yielded the best measured as number of disaggregated viable cells at 37°C for 60 minutes. Disaggregated cells grew better in RPMI 1640 cell medium, maintained at 37°C with poly-D-lysine substrate. Culture of explants resulted better using RPMI 1640 medium at 60mM NaCl, and in this conditions calcium absorption was evaluated by atomic absorption espectrophotometric. Our preliminary results provide a clear overview of the pathway that future studies must follow in this innovative scientific and technologic research field. We recommend trying other temperatures in cell enzymatic dissociation, using a digital image analysis for evaluating calcium absorption, and it would be valuable to conduct this kind of experiments with the other pearl oyster species in Mexico, Pteria sterna.

Master thesis

Pinctada mazatlanica, cultivo in vitro, manto BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA BIOLOGÍA ANIMAL (ZOOLOGÍA) ZOOLOGÍA MARINA ZOOLOGÍA MARINA