Título
Estudio de la interacción de nanopartículas de CdS-dextrina con componentes sanguíneos y sus efectos fisiopatológicos asociados
Autor
YANETH ANAHI RODRIGUEZ LOPEZ
Colaborador
MARIA DE LOURDES RODRIGUEZ FRAGOSO
Nivel de Acceso
Acceso Abierto
Resumen o descripción
RESUMEN
Las nanopartículas (NP) al ser administradas de manera sistémica van a interactuar
con componentes de la sangre. Las interacciones entre las NP-célula aún no se
comprende bien. Las NP de sulfuro de cadmio-dextrina (CdS-Dex), son nanomateriales
inorgánicos en el orden de nanómetros (3 nm), con propiedades ópticas que presentan
ventajas sobre los biomarcadores fluorescentes tradicionales, lo que permite su uso en
detección de fluorescencia e imágenes sin casuar daño en tejidos a largo plazo, por lo
que se consideran biocompatibles con el organismo. La hipótesis de este trabajo es que
las NP de CdS-Dex al interactuar con componentes sanguíneos, pueden desencadenar
procesos fisiopatológicos en forma concentración dependiente. El objetivo de este
proyecto es evaluar la interacción de NP de CdS-Dex con componentes sanguíneos y
sus posibles efectos fisiopatológicos asociados. Las NP de CdS-Dex se evaluaron in
vitro con componentes sanguíneos de ratas Wistar a concentraciones de 0,1, 1, 10,100
y 1000 μg/mL. Se evaluó el efecto de la interacción de NP de CdS-Dex con albúmina,
por electroforesis en gel SDS-PAGE y el potencial Z. Los resultados sugieren que se
forma la corona de proteínas, principalmenre de albúmina, siendo evidente a 100 y 1000
μg/mL. Este proceso generó un potencial Z bajo, es decir, que hay una mayor atracción
entre las NP de CdS-Dex y la albúmina. Por otro lado, estas nanopartículas causaron
una alteración en el tiempo de cambio de protrombina, siendo concentración y tiempo
de exposición dependiente a partir de 5 minutos, para 0.01 y 0.1 ug/mL y hasta 30
minutos para 0.1 a 10 ug/mL de NP de CdS-Dex. Lo cual puede indicar que, a mayor
concentración y tiempo de exposición, comienza a activarse la vía extrínseca y podría
desencadenarse la cascada de coagulación. Sin embargo, las NP no alteran la
concentración de fibrinógeno de manera significativa. Así mismo, el estudio sobre
eritrocitos aislados de rata , por medio de un ensayo de hemólisis y análisis topográficos
usando métodos como espectrofotometría y microscopia de fuerza atómica (AFM),
mostraron que NP de CdS-Dex produjeron hemólisis (5%) con todas las
concentraciones utilizadas y causaron cambios morfológicos como pérdida de
biconcavidad y grietas en la superficie a 0.1 y 1 μg/mL (30 min). En eritrocitos incubados
a 60 min, además de la pérdida de biconcavidad, hubo presencia de depósitos en la
superficie, que aumentó de una manera dependiente de la concentración. No hubo
cambio al determinar el potencial ζ, en ninguna de las concentraciones. Las NP de CdS Dex no fueron internalizadas por los eritrocitos, aunque se observó fluorescencia verde
en la periferia de cada célula. En la evaluación por microscopia de fluorescencia y
agregación plaquetaria, las NP de CdS-Dex causaron agregación plaquetaria a partir
de 0.01 µg/mL y modificaron la morfología de la plaqueta. Se evaluó la viabilidad celular
de Mɸs por la técnica de MTT. Se observó que no produjeron disminución de la
viabilidad celular a concentraciones de 0.001 hasta 100 µg/mL, aunque fueron
analizadas por microscopia confocal y se observó que se localizaban en todo el interior
de la célula, hasta nucleolos. En estas células inducen la producción de óxido nítrico y
fagocitosis a partir de 0.01 µg/mL, siendo mayor el efecto observado en la concentración
de 1000 µg/mL. Finalmente, por estudios in silico el acoplamiento molecular reveló que
la dextrina que recubre a las NP podría estar interactuando con el transportador de
glucosa GLUT1. No se puede determinar si estos cambios podrían estar asociados con
alteraciones funcionales. Estos hallazgos evidencian que los nanomateriales
interactúan con diferentes componentes sanguíneos y pueden causar procesos
fisiopatológicos asociados después de la administración en el organismo.
ABSTRACT
When NP were administered systemically will interact with components of the blood.
These NP-cell interactions are not yet well understood. CdS-Dex NP are inorganic
nanomaterials of nanometric size (3 nm), have an optical property that exhibit
advantages over traditional fluorescent biomarkers and include imaging and
fluorescence detection without causing long-term tissue damage, for which they are
considered biocompatible with the body. The proposed hypothesis is that CdS-Dex
NP interact with blood components and trigger pathophysiological processes in a
concentration-dependent manner. The aim of this project was to evaluate the
interaction of CdS-Dex nanoparticles with blood components and their associated
pathophysiological effects. CdS-dextrin NP were evaluated (in vitro) with blood
components at concentrations of [0.1, 1, 10, 100 and 1000 µg/mL], the blood was
obtained from Wistar rats (healthy). In which the effect of the interaction of CdS-Dex
NP with albumin was evaluated by SDS-PAGE gel electrophoresis and the Z
potential. The results suggest that the protein crown is formed, being evident at 100
and 1000 μg/mL. The ζ potential, associated with the formation of the crown protein
of CdS-Dex NP exposed to albumin is low, that is, there is a greater attraction
between the CdS-Dex NP and albumin. The effect of CdS-Dex NP influenced the
prothrombin time concentration and dependent exposure time from 5 minutes (0.01
and 0.1 μg/mL) to 30 minutes (0.1 to 10 μg/mL). This may indicate that, at higher
concentration and exposure time, the extrinsic pathway begins to be activated and
could trigger the coagulation cascade. However, NP did not significantly alter
fibrinogen concentration. The erythrocytes were isolated by centrifugation. A
hemolysis assay and topographic analysis were performed using methods such as
spectrophotometry and AFM, respectively. The Z potential and coupling were also
determined. The CdS-Dex NP produced hemolysis (5 %) with all the concentrations
used and caused morphological changes such as loss of biconcavity and surface
cracks at 0.1 and 1 μg/mL (30 min). In erythrocytes incubated for 60 min, in addition
to the loss of biconcavity, there was the presence of deposits on the surface, which
increased in a concentration-dependent manner. There was no change when
determining the Z potential values, in any of the concentrations used. CdS-Dex NP
were not internalized by erythrocytes, although green fluorescence was observed at
the periphery of each cell. Molecular coupling revealed that the NP-coating dextrin
could be interacting with the glucose transporter GLUT1. In the evaluation by
fluorescence microscopy and platelet aggregation, the NP of CdS-Dex caused
platelet aggregation in a concentration-dependent manner from 0.01 µg / mL and
modified the platelet morphology. The cell viability of Mɸs (RAW 264.7) was
evaluated by the MTT technique. It was observed that they did not produce a
decrease in cell viability at concentrations of 0.001 to 100 µg / mL, although they
were analyzed by confocal microscopy and it was observed that they were located
throughout the interior of the cell, up to nucleoli. Although they increase NO
production and phagocytosis from 0.01 µg/mL, the observed effect being greater at
a concentration of 1000 µg/mL. It cannot be determined if these if these changes
could be associated with functional changes. But we can with these preliminary
findings provide evidence that nanomaterials can interact with different blood
components and can cause associated pathophysiological processes after
administration in the body
Editor
autor
Fecha de publicación
26 de febrero de 2021
Tipo de publicación
Tesis de doctorado
Recurso de información
Formato
Idioma
Español
Cobertura
MEX
Audiencia
Investigadores
Repositorio Orígen
Repositorio Institucional de Acceso Abierto de la Universidad Autónoma del Estado de Morelos
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