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Análisis ultraestructural de la pared celular de cepas mutantes de cdc-24 en el hongo filamentoso Neurospora crassa

Ultrastructural analysis of the cell Wall of mutants strains of cdc-24 in the filamentous fungus Neurospora crassa  

Sergio David Moreno Velásquez (2012)

Durante el establecimiento y  mantenimiento del crecimiento polarizado en  hongos filamentosos se acumulan y coordinan múltiples complejos proteicos en la zona apical, esto con la finalidad de asegurar que los componentes celulares se incorporen a la membrana plasmática y así biosintetizar nueva pared celular. En el hongo filamentoso Neurospora crassa, el factor de intercambio de nucleótido de guanina (GEF) CDC-24, es esencial para el establecimiento y mantenimiento de la polaridad celular. Se ha reportado que la cepa mutante Δcdc-24 es letal y que mutantes condicionantes a temperatura muestran un crecimiento anormal con hifas muy afectadas en su morfología. Sin embargo, no existen estudios a nivel ultraestructural del arreglo intracelular de dichas mutantes. En el presente trabajo se determinó que las tres cepas mutantes de cdc-24 (24-21, 10-19 y 19-3) de N. crassa, presentan grandes afecciones a nivel intracelular. Los análisis fenotípicos de las colonias correspondientes a las tres mutantes, mostraron un crecimiento lento, con aumento en el índice de ramificación, menor índice de conidiación y baja producción de biomasa. Mediante microscopía electrónica de transmisión (TEM), se determinó un arreglo intracelular atípico con numerosos núcleos, mitocondrias y septos en la zona apical de las hifas y un aumento en el grosor de la pared celular, con más de 290 nm de espesor en las tres mutantes. Así mismo, mediante un análisis químico se determinó un aumento en la concentración de quitina para las tres cepas mutantes en comparación con la cepa silvestre. Estos resultados demuestran que una alteración en el producto génico de cdc-24 afecta considerablemente su función y por lo tanto se altera la cascada de señalización que da lugar a un crecimiento polarizado normal y que por lo tanto se afectan procesos tales como el crecimiento, morfogénesis, distribución de organelos y biosíntesis de la pared celular entre otros. 

During the establishment and maintenance of polarized growth in filamentous fungi, multiple protein complexes accumulate and coordinate in the apical zone in order to ensure that the cell components are incorporated into the plasma membrane and new cell wall is synthesized. In the filamentous fungus Neurospora crassa, the guanine nucleotide exchange factor (GEF) CDC-24, is essential for the establishment and maintenance of cell polarity. It has been reported that the mutant strain Δcdc-24 is lethal and the analysis of temperature-conditional mutants show an abnormal hyphal growth and are greatly affected in their morphology. However, there are no ultrastructural studies about the intracellular organization of these mutants. In this study it was determined that the three conditional mutant strains of N. crassa; cdc-24 (24-21, 10-19 and 19-3) are greatly affected, showing intracellular changes. The phenotypic analysis of the three mutants showed colonies with very slow growth, with increased branching index, lower rate of conidiation and low biomass production. Transmission electron microscopy (TEM) revealed atypical intracellular arrangement with a large amount of nuclei, mitochondria and septa in the apical zone of the hyphae, also an increase in cell wall thickness, with more than 290 nm width. Likewise, it was determined by chemical analysis an increase in the concentration of chitin for the three mutant strains compared to the wild type strain. These results demonstrate that an alteration in the product of cdc-24 significantly affects its function and therefore disrupts the signaling cascade that leads to a normal polarized growth and therefore affect processes such as growth, morphogenesis, and organelle distribution as well as cell wall biosynthesis among others. 

Master thesis

Ciencias del mar,Hongo filamentoso,Neurospora crassa BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA MICROBIOLOGÍA HONGOS

Respuesta a inhibidores de melanina y condiciones de estrés en el hongo Lasiodiplodia theobromae

Response to melanin inhibitors and stress conditions in the fungus Lasiodiplodia theobromae

EDELWEISS AIRAM RANGEL MONTOYA (2016)

Lasiodiplodia theobromae es un hongo de la familia Botryosphaeriaceae, reportado como uno de los patógenos más agresivos en vid (Vitis vinifera), causante de la muerte regresiva por botriosferia. Se ha reportado que en diferentes hongos fitopatógenos, la melanina es un compuesto esencial para el desarrollo de la patogénesis. La melanina es un pigmento derivado de la oxidación de compuestos fenólicos e indólicos y dependiendo del precursor, se clasifica en diferentes tipos. En L. theobromae, la melanina se deposita en la superficie interna de la pared celular, sin embargo, se desconoce su papel en el proceso de infección a la vid y los tipos de melanina que produce. El objetivo de este trabajo fue caracterizar la melanina producida por L. theobromae y determinar su papel en la protección al estrés ambiental.

Por ello se estudió la respuesta in vitro de la cepa UCD256Ma de L. theobromae en presencia de inhibidores de melanina, bajo diferentes condiciones de lisis enzimática, estrés oxidativo y radiación UV; y el uso de tirosina como fuente de nutrientes. Los inhibidores utilizados fueron triciclazol y phthalide para DHN-melanina; tropolone y ácido kójico para DOPA-melanina; y nitisinone para piomelanina. Se encontró que L. theobromae tiene la capacidad de producir los tres tipos de melanina, siendo DOPA-melanina el principal, el cual es sintetizado mediante la polimerización de tirosina. Este aminoácido también puede ser utilizado como fuente de nutrientes. La melanina protege al hongo de la lisis enzimática y del estrés oxidativo. También le brinda resistencia a las esporas pigmentadas en la exposición a UV.

Master thesis

Melanina, inhibidores de melanina, Lasiodeiplodia theobromae BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA MICROBIOLOGÍA HONGOS

Identificación y caracterización de las cargas intracelulares asociadas a la miosina de clase V en el hongo filamentoso Neurospora crassa

Identification and characterization of intracellular cargoes associated to class V myosin in the filamentous fungi Neurospora crassa

ARIANNE RAMIREZ DEL VILLAR (2019)

El crecimiento apical polarizado es una característica fundamental de los hongos filamentosos, donde el movimiento de vesículas secretoras se realiza con ayuda de proteínas motoras a través del citoesqueleto de actina y microtubular. Específicamente, las miosinas de clase V son motores moleculares asociados a actina encargadas del transporte de cargas intracelulares en diferentes organismos. La asociación con la carga es mediada por la unión a adaptadores específicos. En Neurospora crassa existe solo una miosina de clase V (MYO-5) pero aún no queda claro las cargas que transporta, su dinámica y posible función en la morfogénesis de las hifas. Para identificar los adaptadores asociados con MYO-5, se hizo un ensayo de CoIP con anticuerpos anti-GFP utilizando la cepa MYO-5-GFP. Las proteínas aisladas fueron identificadas por espectrometría de masas y los adaptadores fueron seleccionados por análisis bioinformático, modelaje estructural y acoplamiento molecular. Las proteínas SNA-10 y RBA-1 fueron seleccionadas y se analizaron in silico para corroborar su asociación con MYO-5. Encontramos que la unión con estos adaptadores producía una gran estabilidad estructural en el dominio globular de la cola (GTD) de MYO-5, sugiriendo que SNA-10 y RBA-1 podrían estar asociados a MYO-5. El marcaje de los adaptadores con GFP para corroborar su asociación in vivo, afectó el desarrollo normal de las hifas. Para determinar la importancia del GTD de MYO-5 en la morfología de las hifas, generamos una versión truncada del GTD completo y una versión donde eliminamos el subdominio II en el GTD, y se analizó la localización de MYO-5. A diferencia de lo reportado, la morfología fue normal y la localización distinta en las hifas. Esto podría deberse a que el casete con el que se transformó pudo integrarse en otro sitio. Para conocer el comportamiento dinámico de MYO-5 con mayor detalle, analizamos las partículas individuales por TIRFM. Las partículas de MYO-5-GFP eran de distintos tamaños y la mayor parte del tiempo no se movían. Cuando se movían mantenían una velocidad de 1.08 µm s-1, aunque podían alcanzar velocidades de hasta 2.7 µm s-1 y el movimiento podía ser anterógrado o retrogrado. La velocidad de desplazamiento de MYO-5 sugiere que se trata de un motor no procesivo, que podría requerir de más de MYO-5 para transportar las cargas. Debido al efecto, previamente reportado, que la ausencia del gen completo myo-5 producía en la morfología de las hifas, observamos ...

Polarized apical growth is a fundamental characteristic of filamentous fungi. It implies the movement of secretory vesicles, which occurs with the help of motor proteins through the actin and microtubule cytoskeleton. Specifically, class V myosins are molecular motors associated with actin responsible for transporting intracellular cargoes in different organisms. Association with the cargo is mediated by binding to specific adapters. In Neurospora crassa there is only one class V myosin (MYO-5) but it is still unclear the cargoes it transports, as well as its dynamics and function in the morphogenesis of the hyphae. To identify the adapters associated with MYO-5, a CoIP assay with anti-GFP antibodies using strain MYO-5-GFP we were performed. The isolated proteins were identified by mass spectrometry and the adapters were selected by bioinformatic analysis, structural modeling and molecular docking. The proteins SNA-10 and RBA-1 were selected and analyzed in silico to corroborate their association with MYO-5. We found that the binding with these adapters produced a great structural stability in the globular tail domain (GTD) in MYO-5, suggesting that SNA-10 and RBA-1 could be associated with MYO-5. The labeling with GFP of these adapters to corroborate their association in vivo, affected the normal development of the hyphae. To determine the importance of the GTD in MYO-5 in the hyphal morphology, we generated a truncated version of the complete GTD and a version where the subdomain II of the GTD was eliminated, and analyzed the location of MYO-5. Unlike what has been previously reported, the morphology in the mutants was normal and the MYO-5 location different in the hyphae. This could be due to the fact that the cassette with which it was transformed could have been integrated in another site. To know the dynamic behavior of MYO-5 in better detail, we analyzed the individual particles by TIRFM. The MYO-5-GFP particles were of different sizes and most of the time they did not move. When they moved, maintained a speed of 1.08 µm s-1, although they could reach speeds of up to 2.7 µm s-1 and the movement could be anterograde or retrograde. The travel speed of MYO-5 suggests that it is a non-processive motor, which could require more than one MYO-5 to transport the cargoes. Due to the effect of absence of the complete myo-5 gene, previously reported, produced in the morphology of the hyphae, we observed the location and dynamics of the actin cytoskeleton ...

Doctoral thesis

Adaptadores, miosina, cargas, actina Adapters, myosin, cargoes, actin BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA MICROBIOLOGÍA HONGOS HONGOS

Metagenomic analysis of fungal diversity of marine sediments from the Gulf of Mexico

Análisis metagenómico de la diversidad fúngica en sedimentos marinos del Golfo de México

Lluvia Beatriz Vargas Gastelum (2019)

Fungi are the major participants of the microbiota in the degradation of organic materials. Despite their importance, the fungal community occurrence, abundance, and distribution remain largely understudied and misunderstood, especially in marine environments. This study describes the distribution patterns and associated habitat characteristics of the mycobiota of deep-sea sediments (1000 m and >3500 m depth) collected from the Mexican Exclusive Economic Zone (EEZ) of the Gulf of Mexico (GoM). To extend our knowledge on the fungal community and its distribution in deep-sea sediments, Internal Transcribed Spacer 1 (ITS 1) amplicons were sequenced by Illumina MiSeq from 39 stations sampled across four campaigns in different years (2013, 2015, 2016 and 2017). During the analyses of samples from the 2013 campaign, the results indicated inconsistencies and errors, so it was decided to discard those datasets. In the rest of the campaigns analyzed (2015, 2016 and 2017), during the processing of the sediment samples a mock community control and different negative controls were included, which helped to determine the correct processing of the samples and the sequences. While the mock community helped to process the data and select the fungal databases, the negative controls helped to identify contamination. A total of 4,421 Operational Taxonomic Units (OTUs) were obtained, from which the majority of the assignments corresponded to members of the Ascomycota, unidentified fungi and Basidiomycota. When analyzing the taxonomic composition at different depths of the corer (0-5 cm and 5-10 cm), the same fungal groups found in the top layer of the corer, were found in the layer below, although in less abundance in the latter; this indicated that the sediments in these two layers may present similar characteristics, and to compare fungal communities, a deeper layer should be sampled. Differences across stations were found in the abundance of certain fungal orders including Eurotiales, Saccharomycetales, Capnodiales and unidentified fungi, which were also present in all stations. The majority of the stations shared a mere 31 OTUs, including the worldwide reported genera Penicillium, Rhodotorula and Cladosporium. Both a transient and a conserved community were identified, suggesting their dependence or adaptation to the habitat dynamics, respectively. These results allowed identifying differences of the mycobiota across a wide range of geographic locations with different ...

Los hongos han sido descritos como los participantes principales en la degradación de compuestos orgánicos. A pesar de su importancia, la presencia, la abundancia y la distribución de la comunidad fúngica ha sido poco estudiada y comprendida, sobre todo en ambientes marinos. El presente estudio describe los patrones de distribución y las características del hábitat asociadas a la micobiota de los sedimentos marinos profundos (1000 m hasta >3500 m) colectados de la Zona Económica Exclusiva (ZEE) de México en el golfo de México (GM). Para expandir nuestro conocimiento sobre la comunidad fúngica y su distribución en los sedimentos, se obtuvieron muestras procedentes de 39 estaciones colectadas en cuatro campañas en años diferentes (2013, 2015, 2016 y 2017), se extrajo su ADN, se amplificó el espaciador interno transcrito 1 (ITS 1, por sus siglas en inglés), y se secuenció en la plataforma MiSeq de Illumina. Durante el análisis de las secuencias de la campaña del 2013, se identificaron errores en el set de datos, los cuales no permitieron su correcto análisis, por lo que se decidió descartar esos resultados. En las campañas realizadas en el 2015, 2016 y 2017, durante el procesamiento de las muestras de sedimento, se enfrentaron diferentes retos metodológicos que ayudaron a determinar el correcto procesamiento de las muestras y el análisis de las secuencias obtenidas. El uso de una comunidad control de referencia y añadir diferentes controles negativos fue la mejor opción utilizada y probada para superar estos retos. Mientras que la comunidad de referencia ayudó en el procesamiento de datos y la selección de la base de datos taxonómica, los controles negativos ayudaron a disminuir la señal de contaminación en las muestras. Se obtuvo un total de 4,421 Unidades Taxonómicas Operacionales (OTU, por sus siglas en inglés), de las cuales la mayoría de las asignaciones taxonómicas pertenecían a miembros del filo Ascomycota, hongos no identificados y al filo Basidiomycota. Se observó que las dos capas del sedimento muestreadas (0-5 cm y 5-10 cm) por estación compartían los mismos grupos fúngicos, pero la capa profunda contiene una menor abundancia de estos grupos; este resultado indicó que estas dos capas continuas, podrían presentar las mismas características, por lo que, si se desean observar cambios en la comunidad fúngica, se debería muestrear una capa más profunda. Se encontraron diferencias entre estaciones en relación con la abundancia de ciertos órdenes...

Doctoral thesis

Gulf of Mexico, deep-sea sediments, fungal community, ITS 1 region Golfo de México, sedimentos marinos profundos, comunidad fúngica, región ITS 1 BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA MICROBIOLOGÍA HONGOS HONGOS

Gradientes, permeabilidad y balance de materia en cultivos superficiales de Aspergillus niger

ERIC ORTEGA SANCHEZ (2012)

En el presente trabajo se estudio la fisiología de Aspergillus niger cuando crece sobre superficies sólidas, particularmente, se exploraron tres aspectos: 1. El efecto de la disponibilidad de sustrato en el rendimiento Yx/s, midiendo y considerando el espesor de la biopelícula como un factor que limita la eficiencia biosintética, 2. El cambio de la permeabilidad membranal como función de la concentración de sustrato, S0, y 3. Los gradientes de nutrientes en el agar. A fin de entender mejor la fisiología del cultivo en superficie, se definió la variable s0, como la disponibilidad de sustrato por unidad de área (mgcm-2 ) que se puede calcular como el cociente: S0/a, donde a es la relación A/V del soporte, de tal manera que s0 tiene dos fuentes de variación; el volumen del medio y S0. Entonces, se diseñó un experimento con un rango de s0 entre 6 y 63 mgcm-2 y se estimó el Yx/s, el espesor de la biopelícula, h, y se construyeron las curvas de producción de biomasa y consumo de glucosa; con ello se realizó el balance de materia con ecuaciones empíricas y fue posible deducir 4 propiedades de los cultivos fúngicos en superficie: 1. La densidad volumétrica final del cultivo es independiente de la concentración del sustrato y de su disponibilidad por unidad de superficie del soporte, 2. El espesor final de la biopelícula, h, sigue una función de saturación con respecto a s0. 3. El balance de materia indica que el rendimiento decrece conforme se aumenta s0. 4. Hay una constante de eficiencia de la producción de la biomasa por unidad de superficie que está definida por el máximo espesor posible de la capa del micelio, con una densidad volumétrica dada. La permeabilidad de la membrana al sustrato se estimó a partir de un modelo propuesto, para ello fue necesario medir, a diferentes concentraciones de sustrato (S0), el diámetro hifal (dH), la tasa específica máxima de crecimiento (µmax), además se realizaron las cinéticas de producción de biomasa y consumo de sustrato, el modelo permite estimar la permeabilidad del sustrato a partir de variables fisiológicas. Los resultados indican que cuando se modifica S0 de 12.5 a 100 gL-1 , la permeabilidad membranal disminuye aproximadamente un orden de magnitud. Este resultado podría explicar la baja sensibilidad a la represión catabólica observada en cultivos sólidos. También se observó que el dH disminuye aproximadamente en un 65%, lo cual permite incrementar el área específica de acuerdo a la siguiente relación: H H O x d X A 2 1 4 donde: Ax es el área por gramo de micelio seco, dH es el diámetro promedio de las hifas y ? es la densidad del micelio húmedo. Tal respuesta se puede interpretar como una adaptación morfométrica para incrementar el consumo específico de sustrato. Por otro lado, también se midió el tiempo de recuperación, T1 (tiempo necesario para revertir el campo magnético original después de un pulso de inversión), y la intensidad de señal axial (el campo magnético generado por los nutrientes) a través de imagenología de resonancia magnética nuclear (IRMN), los resultados indican que existen gradientes axiales en el agar, es decir, bajo condiciones de estudio la difusión pareciera ser un paso limitante para el metabolismo. Sin embargo, las imágenes también muestran que después de 72 horas de cultivo, las hifas penetran en el agar como una compensación a la baja disponibilidad de nutrientes en la superficie. También se concluyó que bajo las condiciones de estudio, las señales medidas por IRMN correspondían a todos los nutrientes y no eran exclusivas de la glucosa.

Doctoral thesis

Permeabilidad de las membranas celulares Hongos Mediciones de biomasa Aspergillus niger CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

El papel de los Hongos Micorrízicos Arbusculares y microorganismos asociados en la salud de las raíces del maíz

Marcela Esmeralda Sarabia Ochoa (2012)

Instituto de Investigaciones Agropecuarias y Forestales. Facultad de Biología. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Facultad de Agrobiología. Facultad de Químico Farmacobiología. Programa Institucional de Maestría en Ciencias Biológicas

The primary method of managing crop diseases has been the chemical control. The biological management of diseases caused by pathogens with biological control agents may be an alternative to using pesticides. In this study the effect of arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) and their associated bacteria in the biological control of Pythium ultimum on corn plants was evaluated. Conducted four phases: 1) evaluation of the percentage of colonization of six inocula in roots of two maize varieties; 2) Development of a corn / P pathosystem. ultimum; 3) Evaluation of the effect of inocula in your presimbiótica stage against P. ultimum; and 4) evaluation of the effect of biocontrol microorganisms associated with HMA.

El principal método de manejo de enfermedades de los cultivos ha sido el control químico. El manejo biológico de las enfermedades causadas por patógenos con agentes de control biológico puede ser una alternativa al uso de pesticidas. En este estudio se evaluó el efecto de los Hongos Micorrízicos Arbusculares (HMA) y sus bacterias asociadas en el control biológico de Pythium ultimum en plantas de maíz. Se llevaron a cabo 4 fases: 1) Evaluación del porcentaje de colonización de 6 inóculos de HMA en raíces de 2 variedades de maíz; 2) Desarrollo de un patosistema maíz/P. ultimum; 3) Evaluación del efecto de inóculos de HMA en su etapa presimbiótica contra P. ultimum; y 4) Evaluación del efecto de biocontrol de los microorganismos asociados a los HMA.

Master thesis

CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA FB-M-2012-0162 Opción en interacción planta-microorganismo-insecto Hongos Raíces Maíz

Estudios sobre Regulación Epigenética del Metabolismo Secundario en Penicillium chrysogenum

LADY VANESSA POLANIA OSORIO (2016)

Los hongos filamentosos tienen un gran potencial para producir moléculas bioac-tivas, muchas de ellas de inter ́es para la industria farmacéutica, como por ejemplo antibióticos y antitumorales. Por ello resulta de gran inter ́es la búsqueda declusters del metabolismo secundario que sinteticen nuevos productos naturales. Sin embargo, frecuentemente estos clúster no se expresan en las condiciones habituales de cultivo en laboratorio, y en consecuencia no se sintetizan los compuestos a los que darían lugar. Estos clúster que no se expresan habitualmente se denominan “clúster silentes”, y los compuestos que sintetizan suelen denominarse “crípticos”. El silenciamiento declus-tersdel metabolismo secundario se sabe que depende principalmente de mecanismos de regulación Epigenética. Se conoce como Minería Genómica (Genome Mining) a la búsqueda de nuevas enzimas y productos a partir de la información suministrada por la secuencia de un ge-noma. En el campo del metabolismo secundario comprende un conjunto de estrategias encaminadas a la búsqueda de nuevos clúster, su expresión y la obtención de nuevos metabolitos secundarios. El objetivo de este estudio fue emplear algunas estrategias de Minería Genómica para la manipulación de la regulación Epigenética en P. chrysogenum. NRRL 1951, y provocar cambios en el perfil de metabolitos secundarios producidos. De igual forma, se realizó un análisis para la predicción de clústeres involucrados en el me-tabolismo secundario mediante el análisis del genoma del hongo utilizando el programa bioinformático anti SMASH. Una parte de este trabajo consintió en la aplicación de distintas concentraciones de dos compuestos remodeladores de la cromatina: 5-azacitidina (inhibidor de DNA metiltransferasas) y tricostatina A (inhibidor de histonas desacetilasas), a medios de cultivo líquidos de P. chrysogenum.

Uno de los medios utilizados fue el medio definido MDFP y otro el medio complejo PDB. A continuación los extractos obtenidos se analizaron por LC-MS, y los perfiles cromatógrafos generados fueron examinados con el programa MZmine2, que permitió evidenciar la aparición de cambios en el perfil de metabolitos secundarios en todas las condiciones utilizadas. Se produjeron cambios de manera más significativa en el medio PDB con la concentración de 250μM de 5-azacitidina y 1μM de tricostatina A. Se utilizaron además técnicas moleculares para modificar la regulación Epigenética. Se construyó un vector para el silenciamiento por medio de la vía RNAi (RNA inter-ferente) del gen cclA, cuyo producto hace parte del complejo COMPASS, un efector transcripcional que actúa favoreciendo el estado de heterocromatina. Con este vector de silenciamiento se obtuvieron ocho cepas transformantes de P. chrysogenum, que fueron analizadas mediante PCR para confirmar la integración del vector. Finalmente, se llevó a cabo un análisis con el software bioinformático anti SMASH de la secuencia genómica de P. chrysogenum Wisconsin 54-1255, con el objeto de predecir clúster del metabolismo secundario, dando como resultando un aumento con-siderable en el número y clase de compuestos predichos en comparación con un estudio previamente realizado en este hongo con otro programa. En resumen, en el presenten estudio se pusieron a punto varias estrategias comple-mentarias con el propósito de encontrar nuevos compuestos bioactivos producidos por. Chrysogenum.

Master thesis

Epigénetica Hongos Metabolitos CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Caracterización de hongos entomopatógenos, agentes de control biológico de diaphorina citri

LIVIER GUIZAR GUZMÁN (2013)

"Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae antes Psyllidae)), es de las plagas más importantes de los cítricos por ser vector de la bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus, la cual causa la enfermedad llamada Huanglongbing; su presencia en México, representa una seria amenaza para 526 mil hectáreas de cítricos. D. citri es atacada por diversas especies de hongos entomopatógenos, incluyendo a las del género Metarhizium (Ascomycota: Cordycipitales), que son hongos del suelo, patógenos facultativos de insectos de más de 200 especies, incluyendo D. citri. En el presente estudio, en busca de especímenes infectados con hongos entomopatógenos, se colectaron adultos vivosde este insecto en los municipios de Papantla y Tlapacoyan, en el Estado de Veracruz, México, obtenidos de limón persa (Citrus latifolia) y limonaria(Murraya paniculata), las muestras obtenidas se mantuvieron en laboratorio en cámara húmeda. Se detectó e identificó una especie del género Entomophthora Cohn sensu stricto (Entomophthoromycota: Entomophthorales) infectando 1.4% de insectos adultos. D. citri es un nuevo registro de hospedero a nivel mundial para este género de hongos entomopatógenos. Los caracteres utilizados para la identificación y clasificación de especies de los hongos entomopatógenos (Ascomycota: Hypocreales) son ambiguos la mayoría son casi exclusivamente anamórficos, lo que complica definir la diversidad genética intra- e interespecífica. Estudios moleculares recientes han revelado que M. anisopliae es un complejo de especies que contiene al menos nueve diferentes taxones. En este estudio se reporta por primera vez la presencia de M. robertsii en los Estados de Coahuila, Nuevo León, Veracruz y San Luis Potosí y M. brunneum “alterno” en Tabasco, Chiapas, Colima y Tamaulipas, México."

Abstract: Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae (before Psyllidae)), is one of the most important citrus pests; such insect is a vector of the bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus, which is the puntative agent of the disease called Huanglongbing. Its ocurrence to Mexico, represents a serious threat to526 000 hectares of citrus. D. citri is attacked by various species of entomopathogenic fungi, including the genus Metarhizium (Ascomycota: Codycipitales), which is a soil fungus, and insect pathogen of over 200 species, including D. citri. In the present study, live adults of this insect living in the municipalities of Papantla and Tlapacoyan, in the State of Veracruz, Mexico were collected for infection with entomopathogenic fungi, obtained from Persian lime (Citrus latifolia) and orange Jasmine (Murraya paniculata), samples were kept in humid chambers in the laboratory. A species of Entomophthora sensu stricto Cohn (Entomophthoromycota: Entomophthorales) was detected and identified infecting 1.4% of adult insects. D. citri is a new host world record for this genus of entomopathogenic fungus. Characters used for identification and classification of species of entomopathogenic fungi (Ascomycota: Hypocreales) are ambiguous, since most are almost exclusively anamorphic, complicating to define intra- and interspecific genetic diversity. Recent molecular studies have revealed that M. anisopliae is a species complex that contains at least nine different species many morphologically identical. In this study, we report for the first time the presence of M. robertsii in the States of Coahuila, Nuevo Leon, Veracruz and San Luis Potosi and M. brunneum "alternate" in Tabasco, Chiapas, Colima and Tamaulipas, Mexico.

Master thesis

Hongos Agentes Diaphorina citri, especies moleculares CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

La tenia de nematodos: el hongo parásito spirogyromyces vermicola en poblaciones de rhabditis (nematoda) y caenorhabditis elegans

MARTHA SANTIS SANTIS (2016)

"Spirogyromyces vermicola es capaz de desarrollarse en Rhabditis sp. y liberar sus conidias maduras a través del ano de los nematodos al medio para perpetuar su especie. Se desconoce si puede penetrar e infectar a otras especies de nematodos y hasta qué punto puede afectar la población de Rhabditis sp; por lo que el objetivo de este trabajo fue responder estas interrogantes. Para el aislamiento de S. vermicola se empleó la metodología propuesto por Barron (1967). Se identificó el hongo a partir de muestras de suelo. Se tomaron cinco nematodos infectados, los cuales se colocaron en cajas de Petri con poblaciones de Rhabditis sp. no infectadas previamente establecidas. De esta manera se establecieron poblaciones de Rhabditis sp. infectadas con S. vermicola. Para evaluar si S. vermicola puede establecerse en Caenorhabditis elegans, se fragmentaron veinte nematodos infectados de Rhabditis sp. y se colocaron en cajas que contenían poblaciones de C. elegans. Para determinar el porcentaje de infección y efecto del hongo sobre poblaciones de Rhabditis sp., se colocaron diez cajas de Petri con papel de estraza húmedo con diez nematodos infectados y diez no infectados; once días después de la inoculación se extrajo el papel y se colocó en frascos de vidrio con 20mL de agua, se agitó y prepararon montas de la suspensión para observar el porcentaje de infección; se contabilizó el total de la población. Se realizó el mismo procedimiento para C. elegans con la diferencia de que las observaciones se realizaron en medio PDAYH (Agar papa dextrosa, extracto de levadura y yema de huevo). El efecto de S. vermicola en Rhabditis sp. y C. elegans, no fue estadísticamente significativo; en Rhabditis sp., aun cuando redujo 21.2% la población, con una incidencia del 59%. Por otro lado si logra establecerse en C. elegans con una incidencia del 45% y una reducción en la población de 8.5%. Por tanto en estas observaciones, S. vermicola no afecta las poblaciones de nematodos aun cuando completa su ciclo de vida en el hospedero."

ABSTRACT: Spirogyromyces vermicola is able to develop in Rhabditis sp. and release its mature conidia through the anus of nematodes as the means to perpetuate their species; it is unknown whether it can penetrate and infect another species of nematodes and to what extent it can affect the population of hosts; so the aim of this study was to answer these questions. For isolation of S. vermicola we used the methodology of Barron (1967); two weeks after sampling, five infected nematodes were taken, and placed in Petri dishes with uninfected populations of Rhabditis sp. previously established, in order to establish infected populations of Rhabditis. To assess whether S. vermicola can infect another host, twenty infected Rhabditis sp nematodes were fragmented and placed in petri dishes containing populations of Caenorhabditis elegans. To determine the percentage of infection and effect of the fungus on nematode populations, ten Petri dishes were set with wet brown bag paper and mealworms as nematode food. Ten infected and ten uninfected nematodes were placed in dishes. Eleven days after inoculation the paper was removed and placed in glass jars with 20 mL of water, stirred and the suspension was observed to determine the percentage of infection and total population. The same procedure was repeated for C. elegans with the difference that observations were made on PDAYH (potato dextrose agar, yeast extract and egg yolk). The effect of S. vermicola in Rhabditis sp. and C. elegans, was not statistically significant even though in Rhabditis sp., populations were reduced 21.2% with an incidence (infected individuals) of 59%. For C. elegans, there was an incidence of 45% and a reduction in population of 8.5%. S. vermicola did not affect nematode populations even though it completes its life cycle in hosts.

Master thesis

Hongos Parasitos Enfermedades Spirogyromyces vermicola, CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA