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Actividad antioxidante e inhibidora de a-glucosidasa y a-amilasa de tres variedades de cebolla (Allium cepa L.)

LETICIA XOCHITL LOPEZ MARTINEZ OCTAVIO DUBLAN GARCIA LUISA AGUILAR CISNEROS (2014)

La cebolla (Allium cepa L.) ha sido cultivada durante miles de años y es utilizada como un componente importante en la dieta del ser humano. Estudios recientes sugieren que su consumo puede reducir o prevenir problemas de salud como asma, enfermedades cardiovasculares y diabetes, debido a sus efectos antioxidantes. En este estudio se determinó el contenido de compuestos fenólicos totales, la capacidad antiradical y la inhibición de las enzimas α-glucosidasa y α-amilasa de extractos acuosos y etanólicos de tres variedades de cebolla (blanca, amarilla y morada). El contenido de compuestos fenólicos totales varió de 6.59 a 9.25 mg/100 g y la actividad antiradical expresada como % DPPH- se encontró entre 20.4% a 39.6% y de 46.8 a 89.2% para los extractos acuosos y etanólicos respectivamente. Todos los extractos etanólicos fueron capaces de inhibir la actividad α-glucosidasa y α-amilasa de 58% a 34%% y 33 y 22% respectivamente, mientras que los extractos acuosos fueron menos efectivos. Entre los extractos estudiados, el extracto etanólicos de cebolla morada presenta la mayor concentración de compuestos fenólicos totales y la mayor actividad antiradical e inhibidora de α-glucosidasa. Las diferencias encontradas entre la concentración de compuestos fenólicos y las distintas actividades estudiadas parecen depender del perfil único de compuestos fenólicos que posee cada variedad de cebolla.

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Multidisciplinaria Ciencias Naturales y Exactas a-glucosidasa y a-amilasa Allium cepa Capacidad antiradical Compuestos fenólicos BIOLOGÍA Y QUÍMICA

Evaluación del efecto de sonificación-microondas en el beneficio de vainilla (Vanilla planifolia andrews)

Isidro Pacheco Reyes (2017)

El beneficiado o beneficio tradicional de vainilla (Vanilla planifolia Andrews) es un proceso lento y delicado que se desarrolla en periodos de cuatro a seis meses, en el cual se metaboliza en promedio la mitad de vainillina de la que teóricamente se podría obtener; Waliszewski 2007, estima alcanzar del 6 al 7 % de vainillina en relación a los niveles de glucovainillina encontrada en las vainas de madurez fisiológica. El beneficiado tradicional en general consta de cuatro etapas: marchitado, sudado, secado y acondicionado, durante las cuales se desarrolla la reacción de hidrólisis enzimática entre la glucovainillina y la ??glucosidasa, para producir vainillina. Para acelerar el beneficio en frutos de vainilla, es necesario romper las paredes celulares para poner en contacto la glucovainillina y la ?-glucosidasa principalmente. El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de energías alternas de microondas-sonicación en el marchitado y secado del beneficiado de vainilla en dos periodos de cosecha. En el periodo 1 se determinó que el secado convectivo (C) en el beneficiado de frutos de vainilla incrementa el rendimiento de vainillina y, el secado con microondas lo disminuye, en comparación al método tradicional (T). En el periodo 2 se encontró que los máximos rendimientos de vainillina con cualquier tratamiento de marchitado T, en horno de microondas con agua (MOH2O), microondas sin agua (MO) o en baño con sonicación (S), se alcanzan a los 20 días de beneficio. En este mismo periodo se determinó que la relación ??glucosidasa-vainillina es inversamente proporcional de vainas verdes a vainas procesadas; sin embargo, al seguir la cinética de evolución de vainillina en todos los tratamientos no se nota claramente esta relación, que se considera muy determinante dentro de los primeros días de beneficiado de vainilla. La mejor correlación enzima-vainillina se presentó con el marchitado en S, donde no hay diferencias estadísticamente significativas en el rendimiento medio de vainillina. Al utilizar energías focalizadas de sonicación (SF) y microondas (MF) en el marchitado de vainas, el rendimiento de vainillina incrementa, en relación al proceso T; excepto cuando se aplica exceso de microondas.

Master thesis

CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA Energías alternas secado marchitado vainillina ??glucosidasa

Indicadores edáficos bajo diferentes usos del suelo en un ecosistema originalmente ocupado por bosque mesófilo de montaña

Marisol Ramírez López (2019)

El cambio de uso del suelo de forestal a agrícola afecta la calidad edáfica y altera el equilibrio ecológico. Por ello es necesario evaluar la calidad del suelo mediante propiedades que puedan ser útiles como indicadores de su calidad. Los objetivos de este trabajo fueron (i) seleccionar un conjunto mínimo de indicadores de calidad del suelo (ICS) en un área originalmente ocupada por bosque mesófilo de montaña (BMM) en el municipio de Huautla de Jiménez, Oaxaca, México, (ii) conocer la tasa de recuperación de los ICS seleccionados y, (iii) integrar estos indicadores en un índice de calidad del suelo que permita conocer el estado actual de este recurso durante la recuperación del BMM. Para ello se seleccionaron cuatro sitios: dos bosques secundarios de 6 y 20 años posteriores al abandono (BS1 y BS2), una zona agrícola con maíz (ZC) y un bosque secundario no alterado desde hace 31 años, que constituyó el sistema de referencia (BR). En cada sitio se colectaron cinco muestras de suelo a una profundidad de 0-20 cm. Las propiedades edáficas seleccionadas como ICS fueron carbono orgánico (CO), pH, P disponible, contenido de NO3-, actividad de fosfatasa alcalina (FAL), actividad de ?-glucosidasa (BG), carbono recalcitrante (CR) e índice de recalcitrancia del carbono (IRC). El cambio de uso del suelo de forestal a agrícola afectó negativamente el contenido de CO, actividad de FA, CR e IRC. El CO, CR, IRC, contenido de NO3-, actividad de FAL, actividad de BG y pH mostraron una tasa lenta de recuperación después de la conversión del BMM. Mientras que el contenido de NO3- y el pH no mostraron un patrón definido de cambio durante la recuperación del BMM. El índice de calidad del suelo en el BR se ubicó en la clase de muy alta calidad, en tanto que, en el BS1, ZC y BS2 se ubicó en la clase de déficit de calidad. Después de 20 años desde la última perturbación la mayoría de los ICS en los bosques secundarios aún no se encuentran en los intervalos definidos para estos indicadores en el BR, lo que permite inferir que se requieren períodos mayores a 30 años para alcanzar una buena calidad del suelo en los sitios de estudio. Por ello, las prácticas de manejo deben considerar el mantenimiento de bosques de diferentes edades, que incluyan al menos 30 años.

Master thesis

CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA Agricultura ?-glucosidasa cambio de uso del suelo carbono orgánico carbono recalcitrante índice de recalcitrancia del carbono suelo forestal

Evaluación del efecto de sonificación-microondas en el beneficio de vainilla (Vanilla planifolia andrews)

Isidro Pacheco Reyes (2017)

El beneficiado o beneficio tradicional de vainilla (Vanilla planifolia Andrews) es un proceso lento y delicado que se desarrolla en periodos de cuatro a seis meses, en el cual se metaboliza en promedio la mitad de vainillina de la que teóricamente se podría obtener; Waliszewski 2007, estima alcanzar del 6 al 7 % de vainillina en relación a los niveles de glucovainillina encontrada en las vainas de madurez fisiológica. El beneficiado tradicional en general consta de cuatro etapas: marchitado, sudado, secado y acondicionado, durante las cuales se desarrolla la reacción de hidrólisis enzimática entre la glucovainillina y la ??glucosidasa, para producir vainillina. Para acelerar el beneficio en frutos de vainilla, es necesario romper las paredes celulares para poner en contacto la glucovainillina y la ?-glucosidasa principalmente. El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de energías alternas de microondas-sonicación en el marchitado y secado del beneficiado de vainilla en dos periodos de cosecha. En el periodo 1 se determinó que el secado convectivo (C) en el beneficiado de frutos de vainilla incrementa el rendimiento de vainillina y, el secado con microondas lo disminuye, en comparación al método tradicional (T). En el periodo 2 se encontró que los máximos rendimientos de vainillina con cualquier tratamiento de marchitado T, en horno de microondas con agua (MOH2O), microondas sin agua (MO) o en baño con sonicación (S), se alcanzan a los 20 días de beneficio. En este mismo periodo se determinó que la relación ??glucosidasa-vainillina es inversamente proporcional de vainas verdes a vainas procesadas; sin embargo, al seguir la cinética de evolución de vainillina en todos los tratamientos no se nota claramente esta relación, que se considera muy determinante dentro de los primeros días de beneficiado de vainilla. La mejor correlación enzima-vainillina se presentó con el marchitado en S, donde no hay diferencias estadísticamente significativas en el rendimiento medio de vainillina. Al utilizar energías focalizadas de sonicación (SF) y microondas (MF) en el marchitado de vainas, el rendimiento de vainillina incrementa, en relación al proceso T; excepto cuando se aplica exceso de microondas.

Master thesis

CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA Energías alternas secado marchitado vainillina ??glucosidasa

Actividad inhibitoria sobre a-glucosidasa y a-amilasa de extractos acuosos de algunas especias utilizados en la cocina mexicana

Osmery Alín Sevilla Asencio OCTAVIO DUBLAN GARCIA Leobardo Manuel Gómez Olivan LETICIA XOCHITL LOPEZ MARTINEZ (2013)

La diabetes es una de las principales causasde morbilidad y mortalidad en el mundo.Muchos estudios están dirigidos haciala búsqueda de componentes dietariosque sean benéficos para su tratamiento yprevención. El objetivo del presente estudiofue examinar el efecto antioxidante einhibitorio de a-glucosidasa y a-amilasa deextractos acuosos de canela(Cinnamomumzeylanicum),comino(Cuminum cyminum),orégano(Origanum vulgare),pimienta negra(Pipar nigrum)yclavo(Eugenia caryophyllus),que son especias utilizadas comúnmente enla cocina mexicana. Se prepararon extractosacuosos (50 °C durante 3 h) y se determinóel contenido de compuestos fenólicos totales,actividad antioxidante y potencial inhibitorioin vitro de a-glucosidasa y a-amilasa. Elcontenido de compuestos fenólicos totalesvarió de 3.12 a 104.4 mg/g de muestra. Todos losextractos mostraron actividad antioxidanteque fue expresada como porcentaje deinhibición del radical DPPH- (30 % a 80 %)y capacidad inhibitoria de a-glucosidasa de22 % a 70 %. La inhibición de la actividada-amilasa se encontró de O % a 50 %. Losextractos acuosos de canela presentaronmayor capacidad inhibitoria contra la acciónde la a-glucosidasa y actividad contra el radicalDPPH-, los extractos acuosos de oréganomostraron menor inhibición de la actividad a-glucosidasa y no presentaron inhibicióncontra la actividad a-amilasa. La efectividadinhibitoria de las enzimas y el contenido decompuestos fenólicos totales no presentócorrelación. Sin embargo, se encontró unacorrelación entre la actividad antioxidantey el contenido de compuestos fenólicostotales (r2= 0.94, P < 0.05). La inhibiciónde a-glucosidasa y a-amilasa es una delas formas terapéuticas para retardar ladigestión y absorción de los carbohidratosy en consecuencia, la reducción de glucosapostprandial en sangre. El uso de especiasculinarias consumidas en los platillosmexicanos podría representar un usopotencial durante los estados tempranos dehiperglicemia.

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Multidisciplinarias (Ciencias Sociales) A-amilasa a-glucosidasa actividad antioxidante especias CIENCIAS SOCIALES

Evaluación del efecto de sonicación-microondas en el beneficio de vainilla (Vanilla planifolia Andrews)

Isidro Pacheco Reyes (2009)

El beneficiado o beneficio tradicional de vainilla (Vanilla planifolia Andrews) es un proceso lento y delicado que se desarrolla en periodos de cuatro a seis meses, en el cual se metaboliza en promedio la mitad de vainillina de la que teóricamente se podría obtener; Waliszewski 2007, estima alcanzar del 6 al 7 % de vainillina en relación a los niveles de glucovainillina encontrada en las vainas de madurez fisiológica. El beneficiado tradicional en general consta de cuatro etapas: marchitado, sudado, secado y acondicionado, durante las cuales se desarrolla la reacción de hidrólisis enzimática entre la glucovainillina y la ??glucosidasa, para producir vainillina. Para acelerar el beneficio en frutos de vainilla, es necesario romper las paredes celulares para poner en contacto la glucovainillina y la ?-glucosidasa principalmente. El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de energías alternas de microondas-sonicación en el marchitado y secado del beneficiado de vainilla en dos periodos de cosecha. En el periodo 1 se determinó que el secado convectivo (C) en el beneficiado de frutos de vainilla incrementa el rendimiento de vainillina y, el secado con microondas lo disminuye, en comparación al método tradicional (T). En el periodo 2 se encontró que los máximos rendimientos de vainillina con cualquier tratamiento de marchitado T, en horno de microondas con agua (MOH2O), microondas sin agua (MO) o en baño con sonicación (S), se alcanzan a los 20 días de beneficio. En este mismo periodo se determinó que la relación ??glucosidasa-vainillina es inversamente proporcional de vainas verdes a vainas procesadas; sin embargo, al seguir la cinética de evolución de vainillina en todos los tratamientos no se nota claramente esta relación, que se considera muy determinante dentro de los primeros días de beneficiado de vainilla. La mejor correlación enzima-vainillina se presentó con el marchitado en S, donde no hay diferencias estadísticamente significativas en el rendimiento medio de vainillina. Al utilizar energías focalizadas de sonicación (SF) y microondas (MF) en el marchitado de vainas, el rendimiento de vainillina incrementa, en relación al proceso T; excepto cuando se aplica exceso de microondas.

Master thesis

CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA Energías alternas secado marchitado vainillina ??glucosidasa

Cambios en la actividad enzimática en semillas germinadas y no germinadas de leguminosas silvestres.

BEATRIZ GARDUZA ACOSTA (2016)

Tesis (Maestría en Ciencias, especialista en Producción Agroalimentaria en el Trópico).- Colegio de Postgraduados, 2016.

Se estudió el efecto de regímenes de temperatura y tratamiento pre-germinativos sobre el porcentaje (PG), velocidad (VG) de germinación y actividad enzimática de β-glucosidasa, α-D-galactosidasa, β-1,3-glucanasa y α-amilasa de Crotalaria longirostrata y Lupinus exaltatus. Semillas maduras de ambas especies se recolectaron en la región de los Valles y Libres del Serdán, Puebla (L. exaltatus) y en Macuspana, Tabasco (C. longirostrata). El régimen de temperatura mostró un efecto altamente significativo en el PG y actividad de α-D-galactosidasa en ambas especies, y no se detectó actividad de α-amilasa y β-1,3-glucanasa. En L. exaltatus, el mayor PG y VG se presentó en el régimen de 25 °C/25 °C con 25.92 % y 0.68 semillas día-1; y en C. longirostrata en el régimen de 30 °C/20 °C con 6.11 % y 0.20 semillas día-1. En esta especie, la mayor actividad de α-D-galactosidasa se observó en el régimen 7 días a 5 °C seguido de 20 °C/20 °C (10 547.5 U/mg proteína total); y en β-glucosidasa en el régimen de 20 °C/15 °C (215.6 U/mg de proteína total). En C. longirostrata, la mayor actividad, ambas enzimas, se presentó en el régimen de 20 °C/15 °C; 16 162.3 U/mg proteína total y 539.3 U/mg de proteína total de α-D-galactosidasa y β-glucosidasa, respectivamente. Los tratamientos pre-germinativos con H2SO4 al 98 % por 15 min y H2O a 80 °C por 1 min incrementaron la absorción de agua, PG y VG en L. exaltatus y C. longirostrata, respectivamente. A las 120 h después de siembra, las semillas de L. exaltatus alcanzaron un PG y VG de 30.95 % y 0.07 semillas h-1, respectivamente; las de C. longirostrata de 55.56 % y 0.19 semillas h-1. En ambas especies, la actividad de la α-D-galactosidasa fue siempre mayor en semillas enteras y las de α-amilasa y β-1,3-glucanasa fueron extremadamente bajas en ambas especies (< 0.1 U/mg de proteína total). Después de la aplicación del tratamiento pre-germinativo donde se presentó el mayor PG, también se observó la mayor actividad de α-D-galactosidasa. En C. longirostrata, fue a las 72 h en el tratamiento de H2O 80 °C 1 min (82 624.2 U/mg de proteína total) y en L. exaltatus a las 36 h en el tratamiento H2SO4, 98 % 15 min (9 521.3 U/mg de proteína total). En contraste, no se observó relación entre actividad de β-glucosidasa y PG. La mayor actividad de esta enzima se observó a la hora 0 en C. longirostrata (tratamiento H2SO4, 98 % 15 min con 511.3 U/mg de proteína total), mientras que en L. exaltatus se presentó en el tratamiento de 35 °C/25 °C (172.1 U/mg de proteína total). _______________ CHANGES IN ENZYME ACTIVITY OF GERMINATED AND UNGERMINATED SEEDS OF WILD LEGUMES. ABSTRACT: The effect of temperature regime and pre-germinative treatments were studied on the percentage (GP), speed (GS) of germination and enzyme activity of β-glucosidase, α-D-galactosidase, β-1,3-glucanase and α-amylase in Lupinus exaltatus and Crotalaria longirostrata. Dry seeds of both species were collected in the region of Valles del Serdán and Libres, Puebla (L. exaltatus) and Macuspana, Tabasco (C. longirostrata). The temperature regime showed a highly significant effect on the PG and activity of α-D-galactosidase in both species. No α-amylase y β-1,3-glucanase enzyme activity was detected. In L. exaltatus, the highest GP and GS was observed in the regime of 25 °C/25 °C with 25.92 % and 0.68 seeds days-1 and C. longirostrata in the regime of 30 °C/20 °C with 6.11 % and 0.20 seeds day-1. In this specie, an increase of α-D-galactosidase activity was observed in the regime 7 days at 5 °C followed by 20 °C/20 °C (10 547.5 U/mg total protein); and β-glucosidase in the regime of 20 °C/15 °C (215.6 U/mg total protein). In C. longirostrata, the highest activity, both enzymes, was observed in the regime of 20 °C/15 °C; 16 162.3 U/mg total protein (α-D-galactosidase) and 539.3 U/mg total protein (β-glucosidase). The pre-germinative treatment 15 min with 98 % H2SO4 and H2O at 80 °C for 1 min increased water absorption, GP and SG and enzyme activity. At 120 h after seeding, the L. exaltatus seeds reached 30.95 % of GP and a SG of 0.07 seeds h-1; 55.56 % and 0.19 seeds h-1 for C. longirostrata. In both species, the activity of the α-D-galactosidase was higher in the dry seeds and of α-amylase and β-1,3-glucanase were extremely low (< 0.1 U/mg total protein). After application of the pre-germinative treatment that increased GP significatively, a higher α-D-galactosidase activity was also observed. In C. longirostrata, was 72 h after seeding in H2O 80 ° C 1 min treatment (82 624.2 U/mg total protein) and in L. exaltatus at 36 h in H2SO4 98 % 15 min treatment (9 521.3 U/mg total protein). In contrast, no relationship was observed between β-glucosidase activity and GP in both species. Increased activity of this enzyme was observed at time 0 in C. longirostrata (H2SO4 98 % 15 min, 511.3 U/mg total protein), whereas in L. exaltatus was at the treatment 35 °C/25 °C (172.1 U/mg total protein).

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Régimen de temperatura Tratamiento pre-germinativo Germinación α-D-galactosidasa β-glucosidasa Temperature regime Pre-germinative treatment Germination α-D-galactosidase β-glucosidase Producción Agroalimentaria en el Trópico Maestría CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA CIENCIAS AGRARIAS AGRONOMÍA SEMILLAS

Expresión génica del complejo Molecular lectina (ccl)- Β-glucosidasa en maíz

ESTHER ADRIANA CENICEROS OJEDA (2009)

In 2004, it was found a lectin (ccl) and enzyme β-glucosidase (glu1 y glu2) molecular complex in maize coleoptiles. This complex has gained great interest, since β-glucosidase plays extremely relevant roles in plants, like the activation of phytohormones and toxins which provide defense mechanisms against insects. On the other hand, when making a bioinformatical analysis for lectin and using the five peptides reported to date (Molina et al. 2004), it was found that it is constituted by two totally different functional domains: a „jacalin-like‟ lectin domain and a „dirigent‟ domain which in turn is associated to a disease condition. To date, the studies of this complex have been mainly focused to protein characterization. For that reason, we have characterized the gene coding for lectin and quantified the expression levels of the genes coding for each of its components as well, in order to generate novel information that assist the elucidation of the putative function of this molecular complex. In addition to that, we analyzed the regulating regions (transcriptional promoters), and evaluated their response to saline stress and mechanical damage. Our results show that the expression of genes ccl and glu2 keep a co-relation in the stressors evaluated, meanwhile the expression of glu1 is not affected by mechanical damage inflected to the plant. Differences between β-glucosidase gene expression and enzymatic activity found in saline stress, suggest a possible post-translational regulation in response to this stressor.

En el 2004, se encontró en coleoptilo de maíz un complejo molecular formado por una lectina (ccl) y la enzima β-glucosidasa (glu1 y glu2). Este complejo a causado asombro por su singularidad, ya que la β-glucosidasa por si sola tiene funciones altamente relevantes plantas como es la activación de fitohormonas y de toxinas que le sirven a la planta para defensa contra insectos, y por otro lado, la lectina al hacer un análisis bioinformatico, utilizando los 5 peptidos reportados (Molina et al. 2004), encontramos que esta conformada por dos dominios funcionales completamente diferentes, un dominio “lectina tipo-Jacalina” y el otro dominio “dirigente” relacionado a enfermedades. Los estudios que existen con respecto a este complejo, es solo a nivel proteico. Por lo que, nosotros, para poder aportar información novedosa que ayude a elucidar la posible función de este complejo molecular, caracterizamos el gen que codifica para la lectina (ccl) y cuantificamos la expresión de los genes que codifican para cada uno sus componentes, analizamos regiones reguladoras (promotores transcripcionales), además evaluamos su respuesta en estrés salino y daño mecánico. Dentro de nuestros resultados encontramos una alta correlación en la expresión de los genes ccl y glu2 en los dos estresores probados, mientras que la expresión de glu1 no es afectada cuando se causa daño mecánico. Además por las diferencias encontradas entre la expresión del gen y la actividad enzimática en estrés salino podemos sugerir que la β-glucosidasa tiene una posible regulación a nivel postraduccional, en respuesta a este estresor.

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coleoptilo; maíz; complejo molecular; lectina (ccl); enzima; β-glucosidasa (glu1 y glu2) BIOLOGÍA Y QUÍMICA QUÍMICA QUÍMICA ORGÁNICA ENZIMOLOGIA

Efecto de la espermina en la expresión del gen de la amilasa e inmunoglobina M durante el desarrollo larvario de la cabrilla arenera Paralabrax maculatofasciatus

Alicia Mónica Olalde Rodríguez (2005)

"El sistema de cultivo larvario de peces marinos ha sido hasta la fecha un cuello de botella en la acuacultura. Las bajas tasas de supervivencia en dichos sistemas se asocian a la incapacidad de las larvas para adaptarse a la secuencia de alimentación durante las primeras semanas de la crianza (Kolkovsky et el al., 1997). El cambio de alimentación endógena a exógena es concomitante a las transformaciones morfológicas y funcionales del tracto digestivo en larvas. Estudios previos indican que algunos componentes de las dietas inertes, así como alimento vivo, regulan la expresión de algunos genes de enzimas digestivas. Un bajo nivel de enzimas citosólicas, asociado a un aumento en las enzimas de la membrana del borde de cepillo, determinan enterocitos maduros en mamíferos y en peces. Aunado a la información sobre los patrones de expresión y actividad enzimática digestiva como indicadores de maduración digestiva (Tovar- Ramírez et al., 2002) éste es el primer informe que considera la Inmunoglobulina M como parámetro de maduración en larvas de peces marinos. Se obtuvieron huevos de un desove natural de reproductores de cabrilla arenera mantenidos bajo condiciones controladas en el laboratorio de Biología Experimental en CICIMAR-IPN (Rosales-Velásquez, 1997). Las larvas fueron sembradas en un sistema de recirculación cerrada y alimentadas con la microalga Nannochloropsis oculata (300,000 cells.ml-1) hasta 12dde. Las larvas fueron alimentadas con el rotífero Brachionus plicatillis (1-10 rotíferos. ml-1) de 2-15dde, con nauplios de Artemia sp. después de 15dde, y juveniles de artemia (2-6 nauplios ml-1) como tratamiento control. Tres tipos de microcápsulas fueron elaboradas como tratamientos experimentales para el 15dde, conteniendo 0%, 0.1%, y 0.3% de espermina. Las larvas fueron coalimentadas con alimento vivo y las microcápsulas por 5 días. Se obtuvo la cuantificación relativa de la expresión del gene de la amilasa y de la inmunoglobulina M en larvas de cabrilla arenera mediante extracción y la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (RT-QPCR) usando Gene Expression assays de Assays-by-Design SM (Applied Biosystems), consistiendo en una mezcla de unlabeled PCR primers and TaqMan® MGB probes (FAM™ dye-labeled). Las sondas TaqMan® MGB (FAM™ dye-labeled) fueron diseñadas en base a las secuencias parciales de la amilasa y de la inmunoglobulina M de P. maculatofasciatus..."

"Large-scale egg production of marine fish has been a bottleneck in aquaculture systems. Low survival rates in rearing systems are associated with the incapacity of the larvae to adapt to the feeding sequence during the first weeks of culture (Kolkovsky et al., 1997). The change from endogenous to exogenous digestion is concomitant with the morphological and functional transformations of the digestive tract in larvae. Previous reports indicate that some components of the artificial diets, as well as live prey, regulate some digestive enzyme genes. Low levels of some cytosolic enzymes, associated with an increase in enzymes of the brush border membranes, dictates enterocyte maturation in mammals and fish. Contrary to the increasing information on digestive enzymes as maturation digestive indicators, this is the first report which considers the immunoglobulin M as a maturation parameter in marine fish larvae Eggs were obtained from natural spawns of spotted sand bass broodstock maintained under controlled conditions in the Laboratory of Experimental Biology at CICIMAR-IPN (Rosales-Velázquez, 1997). The larvae were reared in a closed recirculating system. Microalgae Nannochloropsis oculata (300 000 cells.ml-1) was added until 12 dah. Larvae were fed rotifers Brachionus plicatillis (1-10 rotifers. ml-1) from 2-15dah, with Artemia sp. nauplii after 15dah, and juveniles (2-6 nauplii ml-1) as a control treatment. Three types of microcapsules were supplied as experimental treatments on 15dah, with 0%, 0.1%, and 0.3% espermine. Larvae were fed live prey and microcapsules for 5 days. We obtained relative quantification of amylase and immunoglobulin M gene expression in larvae of spotted sand bass by RNA extraction and quantitative polymerase chain reaction (RT-QPCR) using Gene Expression assays from the Assays-by-Design SM (Applied Biosystems), consisting of a mix of unlabeled PCR primers and TaqMan® MGB probes (FAM™ dye-labeled). The TaqMan® probes were designed based on the amylase and immunoglobulin M partial sequences of P. maculatofasciatus. The eukaryotic 18S rRNA (Applied Biosystems) was used as the endogenous control for normalizing mRNA levels of the target gene. For the enzyme amylase, the forward primer was 5´GTCTGGTCGGTCTGTTGGA-3´ and the reverse primer was 5´CTTGTTCATGAAGTCAGCAACCTT-3´. For immunoglobulin M, the forward primer was 5´TTCAAAACTGCAGACTGGAACAGT-3´and the reverse primer was 5´CACAGTTCCTTGATGGACTCATGAT-3´..."

Master thesis

Larvas de Paralabrax maculatofasciatus, Microcapsulas, Poliaminas, PCR en tiempo real, Cuantificación genica relativa, amilasa, igm CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA CIENCIAS AGRARIAS PECES Y FAUNA SILVESTRE PISCICULTURA PISCICULTURA