CARACTERIZACIÓN GENÓMICA, MORFOLÓGICA Y REPLICATIVA DEL BACTERIÓFAGO ΦXaF18 DE Xanthomonas vesicatoria

MARCELA RIOS SANDOVAL (2019)

Los bacteriófagos, son virus que infectan a las bacterias. Pertenecen al orden Caudovirales, el cual se compone de tres familias de fagos; Myoviridae que tienen colas contráctiles rígidas, Podoviridae con colas cortas, no contráctiles y Siphoviridae con colas largas y flexibles. Pueden presentar dos fases en su ciclo replicativo, el lítico y el lisogénico. El bacteriófago ΦXaF18 infecta a la bacteria Xanthomonas vesicatoria, agente causal de la mancha bacteriana en plantas solanaceas como el tomate y el chile. A medida que se descubre una mayor diversidad genética de los fagos, el conjunto de sus genes representa un recurso potencial para el desarrollo de herramientas genéticas, biotecnológicas y clínicas, y se ha descrito una gran variedad de utilidades y enfoques. Al emplear a los bacteriófagos como agentes de control biológico es deseable que estos sean líticos y no entren en lisogenia, por ello el objetivo del presente trabajo fue secuenciar y anotar el genoma del bacteriófago ΦXaF18, así como determinar la presencia o ausencia de información genética relacionada con algún mecanismo molecular de regulación de su ciclo lítico-lisogénico en el bacteriófago ΦXaF18, similar a la secuencia codificante para el péptido arbitrium. El bacteriófago fue caracterizado morfológicamente mediante microscopia electrónica de transmisión y caracterizado genéticamente mediante RFLPs con las enzimas BamHI, BclI, BspHI y EcoRI, PCRs específicas para el bacteriófago con ocho juegos de oligonucleótidos, uno de los cuales corresponde a la secuencia codificante de la proteína terminasa subunidad mayor y análisis bioinformático de la secuencia genómica. Además, se realizó búsqueda de genes implicados en el mecanismo de regulación lisis-lisogénia y búsqueda del péptido arbitrium en el genoma del bacteriófago y bajo condiciones in vivo mediante experimentos empleando medio condicionado (medio conteniedo previamente bacteriófago) y este se evaluó mediante curva de crecimiento bacteriano en presencia o ausencia del bacteriófago ΦXaF18. El bacteriófago ΦXaF18 midió 62.5 nm de vértice a vértice de la cápside, 57 nm de lado a lado de la cápside, 85.7 nm de longitud de la cola y el total del largo del bacteriófago fue de 157.5 nm, estas características morfológicas aunadas al análisis filogénico del gen de la terminasa subunidad mayor mostaron que ΦXaF18 petenece a orden Caudovirales y la familia Myoviridae. En todas las enzimas empleadas en la restricción in vivo se observaron (...)"

Tesis de maestría

CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA CIENCIAS AGRARIAS CIENCIAS AGRARIAS