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Las actividades endocrina y sexual de los machos cabríos son estimuladas durante el periodo de reposo sexual al exponerlos a 45 días largos artificiales en diciembre-enero

HILLARY VELÁZQUEZ ORTEGA (2012)

"El presente estudio se efectuó de octubre del 2010 a mayo del 2011 para determinar si 45 días largos artificiales seguidos del fotoperiodo natural estimulan las vi actividades endocrina y sexual de los machos cabríos locales de la Comarca Lagunera durante el reposo sexual. Se utilizaron quince machos cabríos que tenían 8 meses de edad al iniciar el estudio. Estos machos se mantuvieron confinados en corrales abiertos desde el inicio hasta el final del estudio. Un grupo de machos (n = 5) permaneció bajo las variaciones del fotoperiodo natural y temperatura ambiente durante todo el experimento. Otro grupo de machos (n = 5) se sometió a 75 días largos artificiales (16 h luz/día) del 1 de noviembre del 2010 al 15 de enero del 2011. El otro grupo de machos (n = 5) se sometió a 45 días largos artificiales del 1 de diciembre del 2010 al 15 de enero del 2011. A partir del 16 de enero, todos los machos tratados percibieron las variaciones del fotoperiodo natural. Las concentraciones plasmáticas de testosterona, la circunferencia testicular y el olor de los machos se determinaron una vez por semana. La producción de semen se evaluó los primeros 4 días del mes de abril del 2011. El semen se colectó una vez por día, utilizando una vagina artificial en presencia de una hembra inducida al estro artificialmente. El peso corporal se determinó cada 15 días. La concentración plasmática de testosterona varió en los tres grupos durante el estudio (P<0.0001), y existió una interacción grupo x tiempo (P<0.0001). El inicio de la actividad endocrina determinado por el incremento en la concentración plasmática de testosterona (˃5 ng/ml), no fue diferente (P˃0.05) entre los grupos 45 y 75 días, el cual se observó en febrero. En cambio, el final de la actividad endocrina determinado por la disminución en la concentración de testosterona (<5 ng/ml) se observó en abril, pero ocurrió primero en el grupo 45 días que en el grupo 75 días (P<0.05). En el grupo testigo, la concentración de testosterona se incrementó en mayo, cuando inicia la estación sexual natural. En este grupo, la actividad endocrina inició tardíamente que en vii los grupos 45 y 75 días (P<0.01). La circunferencia testicular varió durante el estudio en los tres grupos (P<0.0001), pero en marzo, la circunferencia testicular fue superior en los grupos 45 y 75 días que en el grupo testigo (P<0.05). No existió diferencia entre estos dos últimos grupos (P˃0.05). El olor fue superior en los grupos 45 y 75 días que en el grupo testigo de marzo a mayo (P<0.01). Ninguna diferencia existió entre estos dos últimos grupos (P˃0.05). La latencia a la eyaculación y el porcentaje de rechazos a la eyaculación fueron superiores en los machos del grupo testigo que en los machos de los grupos 45 y 75 días (P<0.0001). Ninguna diferencia existió entre estos dos últimos grupos (P˃0.05). El volumen del eyaculado, la concentración espermática del eyaculado y el número total de espermatozoides por eyaculado fueron superiores en los machos de los grupos 45 y 75 días que en el grupo testigo (P<0.0001). Asimismo, la motilidad espermática progresiva y el porcentaje de células vivas, fueron superiores en los machos de los grupos 45 y 75 días que en los machos del grupo testigo (P<0.0001). Ninguna diferencia existió entre estos dos últimos grupos en las variables mencionadas (P˃0.05). El peso corporal varió durante el estudio en los tres grupos (P<0.0001), y existió una interacción grupo x tiempo (P<0.0001), pero en el mes de febrero, el peso corporal fue superior en el grupo 45 días comparado con el grupo testigo (P<0.05). Estos resultados demuestran que un tratamiento fotoperiódico de 45 días largos artificiales a partir del 1 de diciembre, estimula las actividades endocrina y sexual de los machos cabríos locales de la Comarca Lagunera durante el periodo de reposo sexual natural."

"The present study was made from October 2010 to May 2011 to determine if 45 artificial long-days followed by natural photoperiod stimulate the endocrine and sexual activities ix of the local male goats in the Comarca Lagunera during the sexual rest. At the beginning of the study fifteen male goats had been used when they were 8 months old. These males remained confined in open sheds from the beginning until the end of the study. A group of males (n = 5) remained under natural day length and environmental temperature throughout the experiment. Another group of bucks (n = 5) were subjected to 75 artificial long days (16 h light/day) from November 1st, 2010 to January 15th, 2011. The other group of bucks (n = 5) were subjected to 45 artificial long days from December 1st, 2010 to January 15th. From January 16th, all treated males perceived the changes in the natural photoperiod. The plasma concentration of testosterone, the testicular circumference and the odor of the bucks were measured once a week. The sperm production was evaluated the first 4 days of April, 2011. The semen was collected once per day, using an artificial vagina in presence to a female induced artificially to estrus. The body weight was determined every 15 days. The plasma concentration of testosterone changed in the three groups during the study (P<0.0001), and existed an interaction group per time (P<0.0001). The beginning of the endocrine activity, determined by the increase in the plasma concentration of testosterone (˃5 ng/ml), was not different (P˃0.05) between the groups 45 and 75 days, and was observed in February. In addition to this, the end of the endocrine activity determined by the decrease in the plasma concentration of testosterone (<5 ng/ml) was observed in April, but it happened firstly in the 45 days group than in 75 days group (P<0.05). In the control group, the plasma concentration of testosterone increased in May, when the natural breeding season begins. In this group, the endocrine activity started later than in 45 and 75 days groups. The testicular circumference changed during x the study in the three groups (P<0.0001), but in March, the testicular circumference was higher in the 45 and 75 days groups than in control group (P<0.05). Difference did not exist between the two last groups (P˃0.05). The odor was higher in the 45 and 75 days groups than in the control group from March to May (P<0.01). No difference existed between these last two groups (P˃0.05). Ejaculation latency and the percentage of bucks refusing to ejaculate were higher in the bucks of control group than in the bucks of 45 and 75 days groups (P<0.0001). No difference existed between these last two groups (P˃0.05). The ejaculate volume, spermatic concentration of ejaculate and the total number of spermatozoa per ejaculate were higher in the bucks of 45 and 75 days groups than in the control group (P<0.0001). No difference existed between these last two groups (P˃0.05). The ejaculate volume, spermatic concentration of ejaculate and the total number of spermatozoa per ejaculate were higher in the bucks of 45 and 75 days groups than in the control group (P<0.0001). No difference existed between these last two groups in the mentioned variables (P˃0.05). The body weight changed during the study in the three groups (P<0.0001), and existed an interaction group per time (P<0.0001), but in February, the body weight was higher in the 45 days group compared with the control group (P<0.05). These results demonstrate that a photoperiod treatment of 45 artificial long-days from December 1st, stimulate the endocrine and sexual activities of local male goats in the Comarca Lagunera during the natural non-breeding season."

Master thesis

Caprinos Fotoperiodo Testosterona Circunferencia testicular Producción espermática CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Las actividades endocrina y sexual de los machos cabríos son estimuladas durante el periodo de reposo sexual al exponerlos a 45 días largos artificiales en diciembre-enero

HILLARY VELÁZQUEZ ORTEGA (2012)

"El presente estudio se efectuó de octubre del 2010 a mayo del 2011 para determinar si 45 días largos artificiales seguidos del fotoperiodo natural estimulan las vi actividades endocrina y sexual de los machos cabríos locales de la Comarca Lagunera durante el reposo sexual. Se utilizaron quince machos cabríos que tenían 8 meses de edad al iniciar el estudio. Estos machos se mantuvieron confinados en corrales abiertos desde el inicio hasta el final del estudio. Un grupo de machos (n = 5) permaneció bajo las variaciones del fotoperiodo natural y temperatura ambiente durante todo el experimento. Otro grupo de machos (n = 5) se sometió a 75 días largos artificiales (16 h luz/día) del 1 de noviembre del 2010 al 15 de enero del 2011. El otro grupo de machos (n = 5) se sometió a 45 días largos artificiales del 1 de diciembre del 2010 al 15 de enero del 2011. A partir del 16 de enero, todos los machos tratados percibieron las variaciones del fotoperiodo natural. Las concentraciones plasmáticas de testosterona, la circunferencia testicular y el olor de los machos se determinaron una vez por semana. La producción de semen se evaluó los primeros 4 días del mes de abril del 2011. El semen se colectó una vez por día, utilizando una vagina artificial en presencia de una hembra inducida al estro artificialmente. El peso corporal se determinó cada 15 días. La concentración plasmática de testosterona varió en los tres grupos durante el estudio (P<0.0001), y existió una interacción grupo x tiempo (P<0.0001). El inicio de la actividad endocrina determinado por el incremento en la concentración plasmática de testosterona (˃5 ng/ml), no fue diferente (P˃0.05) entre los grupos 45 y 75 días, el cual se observó en febrero. En cambio, el final de la actividad endocrina determinado por la disminución en la concentración de testosterona (<5 ng/ml) se observó en abril, pero ocurrió primero en el grupo 45 días que en el grupo 75 días (P<0.05). En el grupo testigo, la concentración de testosterona se incrementó en mayo, cuando inicia la estación sexual natural. En este grupo, la actividad endocrina inició tardíamente que en los grupos 45 y 75 días (P<0.01). La circunferencia testicular varió durante el estudio en los tres grupos (P<0.0001), pero en marzo, la circunferencia testicular fue superior en los grupos 45 y 75 días que en el grupo testigo (P<0.05). No existió diferencia entre estos dos últimos grupos (P˃0.05). El olor fue superior en los grupos 45 y 75 días que en el grupo testigo de marzo a mayo (P<0.01). Ninguna diferencia existió entre estos dos últimos grupos (P˃0.05). La latencia a la eyaculación y el porcentaje de rechazos a la eyaculación fueron superiores en los machos del grupo testigo que en los machos de los grupos 45 y 75 días (P<0.0001). Ninguna diferencia existió entre estos dos últimos grupos (P˃0.05). El volumen del eyaculado, la concentración espermática del eyaculado y el número total de espermatozoides por eyaculado fueron superiores en los machos de los grupos 45 y 75 días que en el grupo testigo (P<0.0001). Asimismo, la motilidad espermática progresiva y el porcentaje de células vivas, fueron superiores en los machos de los grupos 45 y 75 días que en los machos del grupo testigo (P<0.0001). Ninguna diferencia existió entre estos dos últimos grupos en las variables mencionadas (P˃0.05). El peso corporal varió durante el estudio en los tres grupos (P<0.0001), y existió una interacción grupo x tiempo (P<0.0001), pero en el mes de febrero, el peso corporal fue superior en el grupo 45 días comparado con el grupo testigo (P<0.05). Estos resultados demuestran que un tratamiento fotoperiódico de 45 días largos artificiales a partir del 1 de diciembre, estimula las actividades endocrina y sexual de los machos cabríos locales de la Comarca Lagunera durante el periodo de reposo sexual natural"

"The present study was made from October 2010 to May 2011 to determine if 45 artificial long-days followed by natural photoperiod stimulate the endocrine and sexual activities of the local male goats in the Comarca Lagunera during the sexual rest. At the beginning of the study fifteen male goats had been used when they were 8 months old. These males remained confined in open sheds from the beginning until the end of the study. A group of males (n = 5) remained under natural day length and environmental temperature throughout the experiment. Another group of bucks (n = 5) were subjected to 75 artificial long days (16 h light/day) from November 1st, 2010 to January 15th, 2011. The other group of bucks (n = 5) were subjected to 45 artificial long days from December 1st, 2010 to January 15th. From January 16th, all treated males perceived the changes in the natural photoperiod. The plasma concentration of testosterone, the testicular circumference and the odor of the bucks were measured once a week. The sperm production was evaluated the first 4 days of April, 2011. The semen was collected once per day, using an artificial vagina in presence to a female induced artificially to estrus. The body weight was determined every 15 days. The plasma concentration of testosterone changed in the three groups during the study (P<0.0001), and existed an interaction group per time (P<0.0001). The beginning of the endocrine activity, determined by the increase in the plasma concentration of testosterone (˃5 ng/ml), was not different (P˃0.05) between the groups 45 and 75 days, and was observed in February. In addition to this, the end of the endocrine activity determined by the decrease in the plasma concentration of testosterone (<5 ng/ml) was observed in April, but it happened firstly in the 45 days group than in 75 days group (P<0.05). In the control group, the plasma concentration of testosterone increased in May, when the natural breeding season begins. In this group, the endocrine activity started later than in 45 and 75 days groups. The testicular circumference changed during the study in the three groups (P<0.0001), but in March, the testicular circumference was higher in the 45 and 75 days groups than in control group (P<0.05). Difference did not exist between the two last groups (P˃0.05). The odor was higher in the 45 and 75 days groups than in the control group from March to May (P<0.01). No difference existed between these last two groups (P˃0.05). Ejaculation latency and the percentage of bucks refusing to ejaculate were higher in the bucks of control group than in the bucks of 45 and 75 days groups (P<0.0001). No difference existed between these last two groups (P˃0.05). The ejaculate volume, spermatic concentration of ejaculate and the total number of spermatozoa per ejaculate were higher in the bucks of 45 and 75 days groups than in the control group (P<0.0001). No difference existed between these last two groups in the mentioned variables (P˃0.05). The body weight changed during the study in the three groups (P<0.0001), and existed an interaction group per time (P<0.0001), but in February, the body weight was higher in the 45 days group compared with the control group (P<0.05). These results demonstrate that a photoperiod treatment of 45 artificial long-days from December 1st, stimulate the endocrine and sexual activities of local male goats in the Comarca Lagunera during the natural non-breeding season"

Master thesis

Caprinos, Fotoperiodo, Testosterona, Circunferencia testicular,Producción espermática CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Determinación de indicadores de maduración epididimaria en espermatozoides de la lagartija Sceloporus Siniferus (Sauria: phrynosomatidae)

FABIOLA MAGALY RETANA SANDOVAL (2016)

Se determinó la maduración, analizando los cambios en la distribución de carbohidratos en la membrana plasmática de las células, además, de los cambios en la fosforilación de los residuos de tirosina de las proteínas. Se observó los espermatozoides epididimarios del caput del epidídimo, mostraron menos de 2 porciento de xii movilidad espermática, mientras que a partir del corpus del epidídimo, los espermatozoides mostraron un aumento significativo de movilidad, que siguió aumentando en los espermatozoides de la cauda. Además de la movilidad espermática, en los carbohidratos N-acetil glucosamina y/o ácido siálico, principalmente a lo largo de todo el espermatozoide, también se observó un aumento a partir de la región del corpus del epidídimo durante los meses de reproducción (mayo-julio), lo que también se corroboró por citometría de flujo. No se detectó la presencia de fucosa en espermatozoides de ninguna de las regiones evaluadas en microscopía de fluorescencia, sin embargo, por citometría de flujo se logró detectar su presencia en cantidades menores respecto al resto de los carbohidratos analizados, incrementándose (no significativamente) a partir del corpus del epidídimo. La fosforilación de residuos de tirosina se observó en el espermatozoide completo, en la cabeza y en la región acrosomal, esta mostró un aumento cuando los espermatozoides fueron obtenidos del corpus. El incremento en la cantidad de N-acetilglucosamina y/o ácido siálico y la fosforilación de proteínas en residuos de tirosinas, se relacionó con un incremento en la movilidad espermática a partir de dicha región. Las evidencias bioquímicas obtenidas en el presente estudio permiten concluir que se producen cambios en los espermatozoides de la lagartija Sceloporus siniferus que podrían considerarse como un proceso de maduración espermática epididimaria.

La maduración espermática epididimaria es el proceso de los espermatozoides de mamíferos, en el que adquieren su capacidad de fertilizar al óvulo después de su tránsito por el epidídimo. Este tránsito no es pasivo, los espermatozoides sufren cambios morfofisiológicos y bioquímicos, que son responsables de la adquisición de las características necesarias para fertilizar. Durante muchas décadas se consideró que en los reptiles el proceso de maduración espermática epididimaria no se llevaba a cabo. Existen trabajos muy puntuales en lagartijas, donde se encontró que, en algunas de ellas, la maduración parece ocurrir y puede ser determinante para que el espermatozoide fertilice. En este trabajo se utilizó como modelo a la lagartija ovípara Sceloporus siniferus (Cope, 1870), o lagartija espinosa, del orden Squamata, familia Phrynosomatidae. Esta presenta un patrón reproductivo estacional de marzo a julio. Los cambios que ocurren en los espermatozoides durante el tránsito por el epidídimo de esta lagartija no se han descrito, por lo que, en este trabajo se estudiaron los cambios en la fosforilación de los residuos de tirosina de las proteínas y en la distribución de los carbohidratos de la membrana de los espermatozoides de S. siniferus durante su tránsito epididimario, para determinar su posible relación el proceso de maduración espermática epididimaria. Debido a la poca existencia de investigaciones realizadas en la especie, para determinar el momento exacto de presencia de espermatozoides, fue necesario capturar organismos mensualmente. Se observó que, los testículos y epidídimos de S. siniferus incrementan su tamaño debido a la presencia de espermatozoides de abril a septiembre y de mayo a septiembre respectivamente.

Master thesis

Lagartos Maduración epididimaria Capacitación espermática Sceloporus siniferus MEDICINA Y CIENCIAS DE LA SALUD

Análisis morfológico del epidídimo y determinación espermática durante la postsaciedad sexual de la rata

YOLANDA LOPEZ RAMIREZ (2017)

La saciedad sexual es la inhibición de la cópula, debido al apareamiento repetido y se reconoce cuando el macho no presenta más patrones motores de monta ni de intromisión durante 30 minutos después del último patrón eyaculatorio. Tras la saciedad sexual, la conducta se restituye gradualmente y el eyaculado también aunque más tardíamente. La concentración espermática que empieza a recuperarse a los 15 días postsaciedad sexual, depende de las funciones epididimarias. El epidídimo es un órgano andrógeno-dependiente; es compacto microtubular que presenta células principales, basales, apicales, estrechas, claras y de tipo halo. Por lo tanto, como primer acercamiento y lo que constituye el objetivo del presente trabajo fue analizar la morfología epididimaria y la determinación espermática que permitan explicar la recuperación de la cuenta espermática, durante la postsaciedad sexual de la rata. En este estudio, se ocuparon ratas macho expertos de la cepa Wistar, los cuales se colocaron en pruebas copulatorias hasta la saciedad sexual. Se ocuparon un total de nueve grupos con una n=3 por grupo. Estos grupos se dejaron recuperar 4, 8, 12, 16, 20, 24 y 28 días postsaciedad sexual, a parte se tuvo un grupo inmediato a la saciedad sexual y un grupo control con una serie eyaculatoria. Posterior a la recuperación, se obtuvieron los epidídimos y se regionalizaron en caput, corpus y cauda. Un epidídimo se utilizo para los parámetros espermáticos: viabilidad, concentración y morfología espermática; el otro epidídimo para analizar la morfología mediante la técnica histológica. En el análisis estadístico se utilizo U Mann-Whitney para la morfometría y tipo celular, y un ANOVA seguida de TukeyKramer para el tipo epitelio y los parámetros espermáticos. Considerándolos significativos con un valor de P<0.05.

Encontramos que posterior a la saciedad sexual, los pesos presentan diferencias significativas (P<0.05), en el peso total, caput y cauda del epidídimo incremento, mientras que en el corpus disminuyó. En cuanto a la citología celular, se observaron cambios en las tonalidades basófilas y acidófilas, encontrando más células inactivas. Esto se relaciona con el conteo de los tipos celulares: se encontraron diferencias significativas (P<0.05), en donde disminuyó el número de células principales, basales y halo. El conteo en el conducto epididimario de los diferentes tipos de epitelio fue: del epitelio simple cilíndrico hubo diferencias significativas (P<0.05) disminuyendo en los días 8 en caput y 12 en cauda. La morfometría mostró diferencias (P<0.05) en las áreas medidas; siendo la altura la que mayor diferencia presentó siendo caput y cauda las más afectadas. Respecto a los parámetros espermáticos, presentaron diferencias significativas (P<0.05) en: concentración los días 0-8 y 16, viabilidad y morfología estuvieron reducidos en los días 0 al 16. En suma, el peso del epidídimo se debió a una posible hiperplasia o bien a que la barrera hematoepididimaria se dañó. En cuanto a la citología celular y el mayor número de células inactivas que se encontraron podría deberse a la disminución de testosterona local. A esto se añade la reducción del conteo celular (principales, basales y halo). Las regiones en donde se observaron cambios en la morfometría fueron caput y cauda, quizás se deba a que el testículo mantiene la producción de espermatozoides que continúan su recorrido por el epidídimo por lo que debe mantener su actividad. Los valores de los parámetros espermáticos epididimarios podrían deberse tanto a la disminución de andrógenos locales como también a que los estrógenos no se encuentren en niveles normales.

En conclusión, encontramos cambios morfológicos en el periodo postsaciedad sexual, lo más acentuados, fueron la disminución en la altura del epitelio, los tipos celulares y los valores de los parámetros espermáticos. Siendo en la concentración espermática la más afectada, viéndose recuperada a partir del día 20 en la cauda del epidídimo. Será necesario indagar sobre el papel de los andrógenos y estrógenos durante la saciedad sexual y el restablecimiento del eyaculado.

Sexual satiety is the inhibition of intercourse due to repeated mating and is recognized when the male has no more motor patterns or intrusions for 30 minutes after the last ejaculatory pattern. After the sexual satiety, the behavior is gradually restored and the ejaculate also, although later. The sperm concentration that begins to recover at 15 days after the sexual satiety, depends on epididymal functions. The epididymis is an androgen-dependent organ; is compact microtubular that presents main, basal, apical, narrow, clear and halo type cells. Therefore, as a first approach and what constitutes the objective of the present work was to analyze the epididymal morphology and sperm determination that allow to explain the recovery of the sperm count, during sexual post-sex of the rat. In this study, expert male rats of the Wistar strain were placed, which were placed in copulatory tests until sexual satiety. A total of nine groups were occupied with n=3 per group. These groups were allowed to recover 4, 8, 12, 16, 20, 24 and 28 days after sex, apart from having an immediate sexual satiety group and a control group with an ejaculatory series. After the recovery, the epididymides were obtained and regionalized in caput, corpus and tail. An epididymis was used for sperm parameters: viability, concentration and sperm morphology; The other epididymis to analyze the morphology through the histological technique. In the statistical analysis U Mann-Whitney was used for morphometry and cell type, and ANOVA followed by Tukey-Kramer for the type epithelium and sperm parameters. Considering them significant with a value of P<0.05. We found that after the sexual satiety, the weights presented significant differences (P<0.05), in the total weight, caput and tail of the epididymis increase, while in the corpus decreased.

As for the cell cytology, changes in basophilic and acidophilic tonalities were observed, finding more cells inactive. This was related to the cell types counting: significant differences were found (P<0.05), where the number of main, basal and halo cells decreased. The count in the epididymal duct of the different types of epithelium was: from the simple cylindrical epithelium there were significant differences (P<0.05) decreasing in days 8 in caput and 12 in tail. Morphometry showed differences (P<0.05) in the measured areas; Being the height that the greater difference was presented caput and tail the most affected. Regarding the sperm parameters, they presented significant differences (P<0.05) in: concentration days 0-8 and 16, viability and morphology were reduced on days 0 to 16. In sum, the weight of the epididymis was due to possible hyperplasia Or to which the hematoepididimary barrier was damaged. As for the cell cytology and the greater number of inactive cells that were found could be due to the decrease of local testosterone. To this is added the reduction of the cellular count (main, basal and halo). The regions where changes in morphometry were observed were caput and tail, perhaps because the testis maintains the production of spermatozoa that continue to travel through the epididymis so it must maintain its activity. The values of the epididymal sperm parameters could be due to the decrease of local androgens as well as to that the estrogens are not in normal levels. In conclusion, we found morphological changes in the post-sexual satiety period, the most pronounced being the decrease in epithelial height, cell types and sperm parameters. Being in the spermatic concentration the most affected, being recovered from day 20 in the tail of the epididymis. It will be necessary to inquire about the role of androgens and estrogens during sexual satiety and the reestablishment of the ejaculate.

Master thesis

Fertilidad Determinación espermática Epidídimo MEDICINA Y CIENCIAS DE LA SALUD

Efecto del ácido perfluorooctanoico sobre el flujo del Ca2+ intracelular durante la capacitación in vitro de espermatozoides de cerdo doméstico

GUADALUPE HERNANDEZ OJEDA (2017)

Perfluorooctanoic acid is a bioacumulative antrhopogenic pollutant, resistant to environmental degradation, which has been used for many years on the industry. Several reports point the toxic effects of PFOA at different biological levels, including the diminish of fertility and sperm count, until homeostasis alteration of Ca2+i in neurons. In sperm cells, Ca2+i plays a vital role on the capacitation and the Acrosomal Reaction (AR), both process involved on sperm maturation and therefore on fertilization. The aim of this study was to determine the effect of PFOA on Ca2+i movilization during capacitation and AR on boar sperm. The theoretical PFOA LC50 was 950 µM; 478 µM and 190 µM were considered as LC50/2 y LC50/5, respectively. However when LC50 was tested it did not show to be lethal for half of the cell population exposed to PFOA. In respect to motility, the percentage of hyperactivated spermatozoa did not change although there was a diminish on the percentage and size of agglutination on a dose dependent manner being 60% at 950 µM. With CTC it was observed that, with PFOA at 950 µM, capacitation and spontaneous AR were kept at 85% and 19% respectivley. But, based on 5 patterns of sperm fluorescence obtained with Fluo-3 AM, which is a fluorescent calcium indicator, PFOA 950 µM decreased capacitation to 54% whereas increased AR to 49%. By flow cytometry three sperm populations were found: M1, M2 and M3; M2 was considered as non capacitated spermatozoa while M3 was considered as reacted and capacitated spermatozoa. Based on this, during capacitation in the presence of PFOA 950 µM on M3 there was a decrease on Fluo3-AM fluorescence, that is Ca2+i, from 28,636 to 20,116. Likewise when the AR was induced with 950 µM of PFOA, Fluo-3 AM fluorescence diminished from 29,131 to 12,743 while at the same time, there was a rise on Fluo-3 AM on M2 from 6,415 to 15,153. Although it was not possible to find the real LD50, with CTC it was observed that PFOA keeps the rate of capacitation and AR, however CTC indicates the Ca2+ on the 4 sperm membrane. When Fluo-3 AM was used, it gave more information and showed a decrease on capacitation because of a rise on reacted sepermatozoa when PFOA was present. This coud be explained by the exit of Ca2+ from the celular storages and acrosome that promoted and accelarated the AR, or by an influx of Ca2+ through typeL Ca2+ channels activated by changes on membrane potential. Also the production reactive oxigen species (ROS) could promote capacitation and accelarate AR. Likewise, with PFOA it was observed a decrease on aglutination that indicates that capacitation is happening, which reinforce that PFOA was promoting sperm capacitation. In contrast to somatic cells, where a non regulated increase of Ca2+i by PFOA can be lethal, on spermatozoa the PFOA stimulated capacitation and AR, although the rise on spontaneous or induced AR, when PFOA was present during capacitaction indicates that this perfluorinated compound could compromise the capacity of the sperm to fertilize. More studies are necesary for a better undertstanding of PFOA mechanisms on Ca2+i regualtion during capacitation and AR on the sperm.

El ácido perfluorooctanoico (PFOA) es un compuesto antropogénico contaminante, no degradable y bioacumulable que se ha utilizado por varios años en diferentes industrias. Existen reportes que indican los diversos efectos tóxicos de los perfluoraduos, incluido el PFOA, en los sistemas biológicos, que incluyen desde disminución de la fertilidad y conteo espermático hasta efectos en la homeostasis del Ca2+i en neuronas. En los espermatozoides, el Ca2+i es una molécula muy importante que participa en los procesos fisiológicos de la capacitación y reacción acrosomal (RA). El objetivo de este trabajo fue determinar los efectos del PFOA en el flujo de Ca2+i en la capacitación y RA del espermatozoide. Se determinó una CL50 teórica de 950 µM de PFOA y se consideraron a 478 y 190 µM como las CL50/2 y CL50/5, respectivamente. Sin embargo, 950 µM PFOA no fue letal para la mitad de la población expuesta a PFOA. En la movilidad no se observaron cambios en el porcentaje de espermatozoides hiperactivados, no obstante, se observó disminución del porcentaje y tamaño de aglutinados (60%) de forma dosis-dependiente. Asimismo con CTC, se observó que con PFOA (950 µM) se mantuvo un alto porcentaje de espermatozoides capacitados (85%) y reaccionados (19%). Al evaluar el efecto del PFOA en el flujo Ca2+i con el indicador fluorescente Fluo-3 AM durante la capacitación y RA, fue posible determinar 5 patrones con base en los que se determinó que a 950 µM de PFOA hubo una disminución en el porcentaje de espermatozoides capacitados (54%) y un incremento de los reaccionados (49%). Con citometría de flujo se determinaron tres poblaciones espermáticas: M1, M2 y M3; considerando M2 como espermatozoides no capacitados y M3 como capacitados y reaccionados. Con base en lo anterior, en la capacitación se observó disminución del índice de fluorescencia (IF), es decir del flujo de Ca2+i, de 28,636 a 20,116 en M3 con 950 µM PFOA. Asimismo, el IF en M3 en la RA inducida con 950 µM de PFOA disminuyó de 29,131 a 12,743 paralelo a un incremento en M2 de 6,415 a 15,153 en M2. 2 Aunque no fue posible determinar la CL50 real, con CTC se observó que el PFOA mantiene la capacitación y la RA, pero CTC es un indicador de Ca2+ de la membrana plasmática del espermatozoide, por lo que el uso de Fluo-3 AM proporcionó más información indicando una disminución en el porcentaje de espermatozoides capacitados debido al incremento de los reaccionados en presencia de PFOA, debido quizá a una movilización de Ca2+ de los almacenes intracelulares y del acrosoma que promovió y aceleró la RA o bien un influjo de Ca2+ a través de la activación de canales de Ca2+ tipo-L por cambios en el potencial de membrana, además de la posible producción de especies reactivas de oxígeno (ROS), que también promueven la capacitación y RA. Asimismo, la desaglutinación de los espermatozoides, que es un indicador de capacitación, muestra que el PFOA posiblemente aceleró la capacitación. Contrario a las células somáticas donde el incremento no regulado de Ca2+i por PFOA puede ser letal para éstas, en espermatozoides estimuló la capacitación y RA, sin embargo, la aceleración de la RA espontánea e inducida en presencia de PFOA mostró que este compuesto podría comprometer la capacidad fertilizante del espermatozoide por lo que se requieren más estudios para un mejor entendimiento del mecanismo de acción del PFOA en la regulación del Ca2+i en el proceso de capacitación y RA del espermatozoide.

Master thesis

Cerdos -- Reproducción Ácido perfluorooctanoico (PFOA) Capacitación espermática BIOLOGÍA Y QUÍMICA

Indicadores de capacitación y reacción acrosomal en espermatozoides criopreservados con dimetilsulfóxido o glicerol de halcón Harris (Parabuteo unicinctus)

CUAUHTEMOC CRUZ VALENCIA (2016)

El objetivo de esta investigación fue determinar indicadores de capacitación y reacción acrosomal en espermatozoides de halcón Harris (Parabuteo unicinctus) en eyaculados recién obtenidos y criopreservados con dimetilsulfóxido (DMSO) y Glicerol, así como los parámetros de viabilidad, movilidad y morfología en cada tratamiento. Se utilizó membrana perivitelina (MPV) heteróloga como inductor de la reacción acrosomal; se empleó clortetraciclina (CTC) para evaluar la actividad de Ca2+ membranal y el marcaje con la lectina Wheat Germ Aglutinin conjugada con Isotiocionato de Fluorosceína (WGA-FICT) para determinar la presencia y distribución de N-Acetil-Glucosamina y ácido siálico en relación a la capacidad fertilizante. Se determinaron 3 patrones de fluorescencia y su proporción en cada tratamiento, cada patrón se asoció a la capacitación espermática y reacción acrosomal. La movilidad espermática en fresco fue de 77.2% lo que fue mayor (P<0.05) a la obtenida en eyaculados criopreservados con DMSO (16.8%) y con glicerol (20%). En eyaculados recién obtenidos se determinó una viabilidad de 95.3% significativamente mayor (P<0.05) a los criopreservados con DMSO 58.1% y 73.6% con Glicerol. Respecto a la morfología espermática, no se encontraron diferencias (P>0.05), entre los eyaculados en fresco y post criopreservación.

Master thesis

Águila de Harris -- Reproducción Parabuteo unicinctus Reacción acrosomal Fluorescencia, viabilidad Capacitación espermática MEDICINA Y CIENCIAS DE LA SALUD

Fertilización in vitro en cerdos

MIGUEL ANGEL MUÑOZ VALDEZ (2005)

"Descripción / Resumen Editar Eliminar "La fertilización in vitro (FIV), empleada con éxito a partir de 1980 para generar embriones humanos y de otras especies animales, se basa en el cocultivo de gametos femeninos madurados in vitro con espermatozoides capacitados. Tres problemas undamentales de la reproducción asistida del cerdo son la maduración de los ovocitos, la capacitación espermática y la polispermia. Para poder abordarlos en el futuro implementamos un método apropiado para la FIV del cerdo en cuatro etapas: obtención de complejos cúmulo-ovocito (CCO), maduración in vitro (MIV) de CCO, capacitación de espermatozoides0000 y cocultivo de gametos. Obtención de CCO. En cada experimento fueron empleados 10 ovarios de hembras de talla comercial, transportados del rastro al laboratorio en soluciónsalina amortiguada con fosfatos a 4°C con penicilina, estreptomicina y anfotericina. Los CCO fueron aislados a partir de folículos de 0.3-6 mm de diámetro mediante corte con bisturí; la tasa de extracción fue ~1.5 CCO/min y la liberación fue lograda agitando el ovario sumergido en medio de Dulbecco con antibióticos. Los CCO liberados fueron aspirados con micropipeta bajo el estereomicroscopio y clasificados por su aspecto: tipo 1, CCO degradados; tipo 2, sin células del cúmulo; tipos 3 y 4 con células del cúmulo disminuidas en número; tipo 5, con el máximo número de células del cúmulo compactas y uniformes. Para la MIV lostipos 3, 4 y 5, con potencial para madurar, representaron el 88% de los CCO aislados. MIV. Grupos de 30-40 CCO de los tipos 3-5 fueron incubados a 38.5°C durante dos periodos sucesivos de 22 h en atmósfera húmeda con CO2 al 5%; el primer periodo en medio 199 con hormona luteinizante y folículoestimulante y el segundo en el mismo medio sin hormonas. Los cambios microscópicos indicativos de maduración de los CCO aptos para FIV fueron:1) aspecto viable (tipo 3-5), 2) células del cúmulo aumentadas en número y tamaño y 3) aparición de zona pelúcida. El 77% de los CCO maduraron in vitro con predominio del tipo 5 (37%), seguido de los tipos 3 (21%) y 4 (19%). Capacitación. Los espermatozoides porcinos (adquiridos de Pig improvement, lote No. 337) a una concentración de 3×106/ml fueron diluidos en medio de Dulbecco a 15×105/ml e incubados 1.5 h a 37°C en atmósfera húmeda con CO2 al 5% para volverlos hipermótiles (indicador principal de la capacitación)."

"In vitro fertilization (IVF), successfully used since 1980 to generate human and other animal embryos, is based in the in vitro coculture of mature female gametes with capacitated spermatozoa. Three major problems of assisted pig reproduction are oocyte maturation, sperm capacitation and polispermy. In order to approach them in the future we implemented an appropriate pig IVF method in four stages: obtention of cummulus-oocyte complexes (COC’s), in vitro maturation (IVM) of COC’s, sperm capacitation, and gamete coculture. Obtention of COC’s. In each experiment 10 ovaries from commercial-size females were used, transported from the slaughterhouse to the laboratory in phosphate-buffered saline containing penicillin, streptomycin and amphotericin at 4°C. COC’s were isolated by scalpel section of 0.3-6 mm-diameter follicles; the rate of extraction was ~1.5 CCO/min and release was attained by shaking the ovary in Dulbecco’s culture medium. Released COC’s were aspirated with a micropipette under a stereomicroscope and classified by their aspect: type 1, degraded COC’s; type 2, without cummulus cells; types 3 and 4 with cummulus cells decreased in number; type 5, with the maximum number of compact and uniform cummulus cells. For IVM, types 3, 4 and 5, with potential to mature, represented 88% of the isolated COC’s. IVM. Groups of 30-40 type 3-5 CCO’s were incubated at 38.5°C for two successive periods of 22 h in a humid atmosphere with 5% CO2; the first period in medium 199 with luteinizing and follicle-stimulating hormones and the second one in the same medium devoid of hormones. The microscopic changes indicating that matured CCO had become apt for IVF were: 1) viable aspect (type 3-5), 2) cummulus cells increased in number and size and 3) a distinctive pellucid zone. Seventy-seven percent of COC’s matured in vitro with predominance of the type 5 (37%), followed by types 3 (21%) and 4 (19%). Capacitation. Pig spermatozoa (purchased from Pig improvement, lot No. 337) at a concentration of 3×106/ml were diluted in Dulbecco’s medium at 15×105/ml and incubated for 1.5 h to 37°C in humid atmosphere with 5% CO2 to make them hypermotile (major indicator of capacitation)."

Master thesis

Cerdo Fertilización in vitro Maduracción de ovacitos Capacitación espermática Cocultivo de gametos BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA BIOLOGÍA MOLECULAR

Cambios en la calidad espermática con suplemento multivitamínico en pacientes con alteraciones espermáticas

Judith Becerra Fragoso Victor Manuel Arroyo Quiroz Hugo Mendieta Zerón (2018)

Se comparten los resultados al dar multivitamínicos en casos de alteraciones espermáticas.

El 15% de los casos de infertilidad se debe a factor masculino. Nuestro objetivo fue valorar los cambios en la calidad espermática con suplementos multivitamínicos. Fue un estudio observacional, transversal, retrospectivo, realizado en la Clínica de Biología de la Reproducción del Hospital Materno Perinatal “Mónica Pretelini Sáenz”, del 01 de Enero al 30 de Julio de 2016, en pacientes que acudieron a consulta por infertilidad primaria y con alteraciones en la espermatobioscopia directa. A todos se les dio suplemento diario multivitamínico. Se valoraron 129 espermatobioscopías, en las cuales hubo astenoteratozoospermia en 35%, teratozoospermia en 35% y normozoospermia en 3%; encontrando mejoría significativa en movilidad en el 51%, y en volumen 46%, pero solo el 22% presentó mejoría en su morfología. Concluimos que los multivitamínicos mejoran la calidad espermática, mejorando sobre todo, la movilidad en pacientes con astenozoospermia.

Article

Calidad espermática Suplemento multivitamínico Alteraciones espermáticas BIOLOGÍA Y QUÍMICA

OPTIMIZACION DE LA CONSERVACION DEL SEMEN PORCINO CON EL DILUYENTE CUBANO DICIP

CLEMENTE LEMUS FLORES (2009)

Pig semen conservation in two Cuban extender of the dicip type was compared through spermatozoid motility according to a split-plot design where the type of extender was the main plot, and the time of conservation (0, 24, 48 and 72 hours) was the subplot. Two hundred and thirty ejaculates from 20 CC21 boars, of 14-24 months old and four days of mating intervals were used. A mannequin was employed for semen extraction by the gloved hand method. Semen quality was evaluated through semen volume, cell motility and concentration, and spermatozoid motility. Sperm resistance had significant (P<0.001) differences at 24, 48 and 72 hours post-dilution between both types of extenders, the new extender, dicip-m showing a better result. Cell motility was 68.5 and 55.8%, 56.8 and 37.1%, and 38.9 and 19.6% at 24, 48 and 72 hours of semen conservation, respectively for the new dicip-m and the dicip extender. The dicip-m extender determined a better survival capacity of semen when compared to the control, corresponding to the old dicip type. The high spermatozoid motility found with dicip-m could be explained by the milieu pH value, which was near neutrality (6.9), with respect to the other dicip extender (6.6). Hence, there was no effect of conservation on the pH value of the semen extended with dicip-m (P>0.05); however, this was evident (P<0.001) )in the other product, dicip, which was used as control (P<0.001). A new extender formula for pig semen was characterized. It was concluded that the buffering system of the new dicip-m extender is more efficient than the control.

Se comparó mediante estudios de motilidad de espermatozoides, la conservación de semen porcino en dos diluyentes cubanos del tipo dicip mediante un diseño de parcela dividida, en el que la parcela principal fue el tipo de diluyente, y la subparcela, el tiempo de conservación (0, 24, 48 y 72 horas). Se utilizaron 230 eyaculados de 20 cerdos del genotipo CC21, con edades comprendidas entre 14 y 24 meses, y una frecuencia de monta de cada cuatro días. Se utilizó un maniquí para la extracción por el método de la mano enguantada. Se evaluó la calidad espermática a través de los indicadores de volumen, motilidad, concentración espermática y calidad del movimiento del espermatozoide. No hubo efecto significativo (P<0.05) de parcela x subparcela para la motilidad de espermatozoides. La resistencia espermática manifestó diferencias significativas (P<0.001) a las 24, 48 y 72 horas postdilución entre tipos de diluyentes, con un mejor comportamiento en el nuevo diluyente (dicip-m) utilizado. Se obtuvieron motilidades de 68.5 y 55.8%, 56.8 y 37.1% y 38.9 y 19.6%, a las 24, 48 y 72 horas de conservación respectivamente para los tratamientos con dicip-m y dicip. El dicip-m mostró una mejor supervivencia del esperma al compararlo con el dicip control. La alta motilidad espermática del dicip-m pudiera explicarse por un mejor valor del pH en el medio, el cual fue casi neutro (6.9) en contraste con otro diluyente dicip (6.6). Así, no hubo efecto de tiempo de conservación en el pH del semen diluído con dicip-m (P>0.05); sin embargo, esto sí fue evidente (P<0.001) en el otro producto, el dicip que se utilizó como control (p<0.001). Se caracterizó una nueva fórmula de diluyente para semen porcino. Se concluyó que el sistema de amortiguamiento del nuevo, dicip-m es más eficiente que el del control.

Article

genotipo calidad espermática amortiguamiento diluyente pig genotype semen quality buffering capacity extender CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Modelado bioeconómico de un sistema de producción intensiva de langosta de agua dulce (C. quadricarinatus)

LAVINIA NUÑEZ AMAO (2017)

"Se llevó a cabo un análisis bioeconómico de la producción comercial intensiva de machos y hembras de langosta de agua dulce (Cherax quadricarinatus). Para ese propósito, se desarrollaron modelos bioeconómicos estocásticos que fueron calibrados usando bases de datos proporcionadas por la granja Red Claw de México, S.P.R. de R.L. Se estableció, como hipótesis para la investigación, que si el crecimiento de los machos es significativamente mayor que el de las hembras, entonces, independientemente de que la supervivencia y el factor de conversión alimenticia que se obtengan con ellos también sean mejores, el sólo proceso de crecimiento debe producir un mejor desempeño bioeconómico que el de las hembras. Se encontró evidencia significativa de que los machos tienen mejor crecimiento y supervivencia que las hembras (P < 0.05), aunque el factor de conversión alimenticia no difirió entre ambos sexos. Con el modelo bioeconómico se compararon dos estrategias de cosecha y se encontró que, la consistente en realizar cosechas independientes de cada sexo, produce ingresos netos y relación beneficio/costo más altos que la basada en realizar cosechas simultáneas de ambos sexos. Con la mejor estrategia, y a los tiempos óptimos de cosecha, con los machos se tiene 95 % de confianza de obtener ingresos netos entre $508 900 y $723 200/ha, promediando $620 505/ha y una relación beneficio/costo entre 3.6 y 5.1, con una media de 4.36. Con las hembras se esperan ingresos netos entre $395 700 y $590 600/ha, con una media de $488 337/ha, y una relación beneficio/costo entre 3.04 y 4.14, con un promedio de 3.56. Se encontró evidencia de que la hipótesis establecida para el trabajo es correcta, ya que la media de los ingresos netos de los machos fue significativamente mayor que la de las hembras (P < 0.05), aun asumiendo para estas últimas una supervivencia igual a la de los machos. Un análisis de sensibilidad indicó que las variables y parámetros utilizados para calcular el porcentaje de machos y hembras incluidos en la categoría comercial entre 40 y 60 g, así como el porcentaje de la población comercial de machos y hembras, fueron los que más influyeron en la variabilidad estocástica de los ingresos netos. Por otro lado, los elementos usados para el cálculo del peso medio individual de la langosta tuvieron moderada o poca relevancia..."

"A bioeconomic analysis of the intensive commercial production of redclaw males and females (Cherax quadricarinatus) was carried out. Stochastic bioeconomic models were developed and calibrated using databases provided by Red Claw de Mexico, S.P.R. de R.L. It was hypothesized that, if the growth of males is significantly faster than that of females, then, regardless of survival and feed conversion ratio of males being better than in females, the growth of males should alone produce a better bioeconomic performance than females. Significant evidence was found indicating that males had better growth and survival than females (P < 0.05), although the feed conversion ratio did not differ between the sexes. The bioeconomic model served to compare two harvesting strategies, where the one involving independent harvests of each sex produces higher net income and benefit/cost ratio than the strategy consisting in simultaneously harvesting both sexes. With the best strategy, at the optimum harvesting times, there is 95 % confidence in obtaining from males net incomes within $ 508 900-$ 723 200/ha, averaging $ 620 505/ha, and a benefit/cost ratio within 3.6-5.1, with an average of 4.36. The net income from females is expected to vary within $ 395 700 and $ 590 600/ha, with a mean of $ 488 337/ha, and the benefit/cost ratio from 3.04-4.14, with an average of 3.56. Even assuming for females a survival as high as the one obtained with males, the mean net income of males was significantly higher than that of females (P <0.05), providing evidence that the hypothesis established for this research is correct. A sensitivity analysis indicated that the variables and parameters used to calculate the percentage of males and females included in the 40-60 g commercial grade, as well as the percentage of the commercial population of males and females, mostly influenced the stochastic variability of net income. On the other hand, the elements used for the calculation of the average individual weight of the redclaw had moderate or little relevance. It is concluded that the objectives of this research regarding a bioeconomic analysis of the intensive commercial production of the redclaw, evaluating the statistical performance of individual growth models, projecting economic indicators, identifying optimum bioeconomic management and risk assessment were satisfactorily accomplished."

Doctoral thesis

Cherax quadricarinatus, langosta, bioeconomía redclaw, bioeconomics CIENCIAS SOCIALES CIENCIAS ECONÓMICAS ACTIVIDAD ECONÓMICA PRODUCCIÓN