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Caracterización de cepas de Candida glabrata que expresan simultáneamente los genes a1 y alfa2 ó a1 y alfa3

KARINA ASYADE ROBLEDO MARQUEZ (2012)

"Candida glabrata es un hongo asexual, patógeno de humanos que tiene una relación filogenética cercana con Saccharomyces cerevisiae, un hongo sexual, no patógeno que a otros hongos de su mismo género. C. glabrata contiene tres loci de apareamiento llamados MTL. El locus MTL1 (que puede contener información tipo a o alfa) y el locus MTL2 (con información tipo a) son transcripcionalmente activos mientras que MTL3 (con información tipo alfa), presenta un silenciamiento incompleto. En el laboratorio encontramos que el gen alfa2 presente en el locus MTL3 (denominado alfa3) es una variante más larga del gen alfa2 que se encuentra en el locus MTL1. En células de S. cerevisiae que expresan simultáneamente información a y alfa, las proteínas a1 y alfa2 forman un heterodímero que reprime varios genes del ciclo sexual y de respuesta a estrés osmótico. En C. glabrata podría formarse un heterodímero en cepas que contienen información a en MTL1 y alfa en MTL3. En este trabajo implementamos la técnica de complementación bimolecular para investigar si se forman los heterodímeros a1/alfa2 ó a1/alfa3. Construimos cepas que expresan simultáneamente los genes a1 y alfa2 o bien a1 y alfa3, y encontramos que estas crecen más lentamente en medio líquido con NaCl, que las cepas que solo expresan un tipo de información o ninguna. PALABRAS CLAVE: C. glabrata, loci MTL, complementación bimolecular por fluorescencia (BiFC)."

"Candida glabrata is an asexual human pathogen, closely related to Saccharomyces cerevisiae, a non-pathogenic sexual fungus. C. glabrata contains three mating type-like loci called MTL. MTL1 (which can contain information type a or alpha), and MTL2 (type a information) are transcriptionally active while MTL3 (type alpha information) is repressed by silencing although not completely. We have found that the alpha2 gene present at the MTL3 locus is a longer variant, called alpha3, of the alpha2 gene present at MTL1. In S. cerevisiae cells that express both types of information, the proteins a1 and alpha2 form a heterodimer that represses several mating genes and genes involved in the response to osmotic stress. In C. glabrata cells an analogous heterodimer could be formed in cells that contain a-type information in MTL1 and alpha-type information in MTL3. In this work we implemented the Bimolecular Fluorescence Complementation technique to determine whether the heterodimers a1-alfa2 or a1-alfa3 can be formed in C. glabrata. We also constructed strains that simultaneously express a1 and alfa2 or a1 and alfa3 genes and found that these strains grow more slowly in liquid media with NaCl than strains that contain only one type, or no mating information."

Master thesis

Complementación biomolecular por flourescencia (BiFC) MTL loci C. glabrata BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA BIOLOGÍA MOLECULAR

Construcción de cepas de Candida glabrata con deleciones en los loci MTL y análisis del estado trascripcional en el locus MTL1. Implicaciones en un posible ciclo sexual

GRISELDA EDITH SALAS DELGADO (2008)

"C. glabrata es una levadura haploide, patógena oportunista, considerada asexual; sin embargo, conserva genes ortólogos a los de Saccharomyces cerevisiae relacionados con el proceso de apareamiento, meiosis y esporulación. Los genes que controlan el apareamiento se encuentran localizados en los loci MTL1, MTL2 y MTL3. MTL1 y MTL3 se encuentran en el cromosoma B y MTL2 en el E. Se cree que MTL1 es el locus que se expresa y que MTL2 y MTL3, que se encuentran localizados cerca de sus respectivos telómeros, a 11 y 29 Kb de ellos respectivamente, son probablemente silenciosos. Estos loci pueden tener información de tipo “a” o “α”, presentando diferentes combinaciones. Dado que C. glabrata posee genes homólogos a los que controlan el apareamiento en S. cerevisiae, nos preguntarnos si podría desarrollar un proceso de apareamiento bajo ciertas condiciones, o bien si estos genes han sido conservados por su participación como reguladores transcripcionales en otros procesos, tales como la virulencia. C. albicans, otro patógeno oportunista relacionado filogenéticamente a C. glabrata, responde a la feromona α activando genes involucrados en virulencia. Estas cepas con deleciones sencillas, dobles y triples en los loci MTL permitirán conocer la expresión de cada uno de los genes presentes en cada locus, y reconstituir cepas que expresen solamente información tipo a o bien tipo α, lo cual nos permitirá buscar experimentalmente condiciones propicias para que el proceso de apareamiento se lleve a cabo."

Master thesis

Locus MTL1 Loci MTL Candida glabrata BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA BIOLOGÍA MOLECULAR

Candida glabrata contiene una variante más larga del gen de apareamiento Cgalfa2 en el locus MTL3, el cual puede formar homodímeros

KARINA ASYADE ROBLEDO MARQUEZ (2016)

"El hongo patógeno Candida glabrata es un organismo haploide y asexual. C. glabrata contiene genes ortólogos que controlan el apareamiento y la identidad del tipo celular en otros hongos, los cuales codifican factores de transcripción localizados en el locus MAT en Saccharomyces cerevisiae o MTL en otros hongos. C. glabrata contiene tres copias del locus CgMTL pero solamente CgMTL1 expresa correctamente la información codificada en éste. CgMLT1 puede contener el gen Cga1 (información a), o los genes Cgalfa1 y Cgalfa2 (información alfa). CgMTL2 contiene una copia idéntica del gen Cga1. CgMTL3 contiene una copia idéntica del gen Cgalfa1 pero una variante más larga del gen Cgalfa2 que nosotros llamamos Cgalfa3. En S. cerevisiae las células diploides que expresan información Sca y Scalfa, forman un heterodímero entre las proteínas Sca1 y Scalfa2, el cual reprime genes que son específicos de haploidía y algunos genes involucrados en la respuesta a estrés. En este trabajo contruimos cepas de C. glabrata que expresan de manera simultánea los genes Cga1 y Cgalfa2 ó bien Cga1 y Cgalfa3. No encontramos ningún fenotipo característico cuando cultivamos las cepas que expresan simultáneamente Cga1-Cgalfa2 ó Cga1-Cgalfa3 en una variedad de condiciones de estrés y diferentes fuentes nutricionales. Sin embargo, detectamos una interacción entre Cga1 y Cgalfa2 mediante Complementación Bimolecular por Fluorescencia (BiFC) y CoIP (Co-inmunoprecipitación), además también observamos que la proteína Cgalfa3 puede formar homodímeros. En cambio, la proteína Cgalfa2 no forma heterodímeros eficientemente."

"The fungal pathogen Candida glabrata is a haploid asexual yeast. C. glabrata contains orthologues of 􀀁the genes that control mating and cell type identity in other fungi, which encode putative transcription factors localized in the MAT locus in Saccharomyces cerevisiae or MTL in other fungi. C. glabrata contains three copies of the CgMTL locus but only CgMTL1 correctly expresses the information encoded in it. CgMTL1 can encode the Cga1 gene (a information), or the Cgalpha1 and Cgalpha2 genes (alpha information). CgMTL2 contains an identical copy of the Cga1 gene. CgMTL3 contains an identical copy of the Cgalpha1 gene but a longer variant of the Cgalpha2 gene we termed Cgalpha3. In S. cerevisiae diploid cells that express a and alpha information, Sca1 and Scalpha2 proteins form a heterodimer, which represses genes expressed only in haploid cells and some genes involved in response to stress. We constructed C. glabrata strains that simultaneously express Cga1 and Cgalpha2 or Cga1 and Cgalpha3 genes. We did not find any phenotype in these strains when grown under a large variety of stress and nutritional conditions. However, we could detect an interaction between Cga1 and Cgalpha2 and the formation of Cgalpha3 homodimer by Bimolecular Fluorescent Complementation and Co-IP. However, Cgalpha2 does not form heterodimers efficiently."

Doctoral thesis

Candida glabrata Genes de apareamiento Factores de transcripción Heterodímero Loci de apareamiento (MTL), Genes codificados en MTL BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA BIOLOGÍA MOLECULAR

Los factores trascripcionales a1, α1 y α2 de Candida glabrata participan en la respuesta y adaptación al estrés

PATRICIA YAÑEZ CARRILLO (2010)

"Candida glabrata es una levadura patógena oportunista considerada la segunda especie del género Candida de mayor prevalencia después de Candida albicans. Es un organismo haploide considerado asexual, aunque conserva genes ortólogos a los de Saccharomyces cerevisiae involucrados en los procesos de apareamiento, meiosis y esporulación. C.glabrata posee tres loci de apareamiento, llamados MTL (mating type like). En nuestra cepa silvestre de laboratorio tanto MTL1 como MTL2 poseen información de apareamiento tipo a pues contiene el gen a1 y en el locus MTL3 información tipo α que contiene los genes α1 y α2. Estos genes codifican factores transcripcionales cuyo circuito de regulación es conocido en S. cerevisiae y C. albicans, pero en C. glabrata, se desconoce su función. En este trabajo nos propusimos identificar la posible función de estos genes mediante la evaluación fenotípica de una batería de cepas mutantes de C. glabrata en los loci MTL y un cepa sobreexpresante de información a en el locus MTL1 que nos permitiera determinar una posible función de estos factores transcripcionales en respuesta a diferentes tipos de estrés. Evaluamos el fenotipo de cada una de las cepas en respuesta a estrés. En la mayoría de los medios utilizados encontramos un fenotipo similar de nuestras cepas mutantes en los loci MTL respecto a la cepa silvestre (WT), excepto en los medios con hidroxiurea (HU), cloruro de sodio (NaCl) y peróxido de hidrógeno (H2O2) que producen estrés durante la replicación del DNA, osmótico y oxidativo respectivamente, donde las cepas que con sólo un tipo de información de apareamiento o ninguno, son más resistentes que la cepa silvestre (WT). Proponemos que en la cepa WT una proporción de células que expresan ambos tipos de información de apareamiento (a y α) debido a un silenciamiento incompleto de uno de los loci “silenciosos” y se produce la formación del heterodímero a1/α2 que podría no participar en un ciclo sexual pero sí en otros procesos de adaptación y resistencia a distintos tipos de estrés importantes para la sobrevivencia de C. glabrata en el hospedero mamífero."

"Candida glabrata is an opportunistic pathogenic yeast that is the second most frequent Candida species isolated from bloodstream infections worldwide. C. glabrata is a haploid organism that has been considered asexual, even though it retains orthologues to the majority of S. cerevisiae genes involved in mating, meiosis and sporulation. C. glabrata contains three mating loci called MTL (mating type like) organized in a similar configuration to that of S. cerevisiae. In our wildtype strain both MTL1 and MTL2 contain the a1 gene and MTL3 locus contains α1 and α2 genes. The transcriptional circuit controlled by the orthologues of these transcription factors in S. cerevisiae and Candida albicans is well described, however in C. glabrata its role is not clear. In order to assess whether these transcription factors participate in response to stress, or are important for growth under specific conditions, we set out to determine the phenotype of a collection of single, double and the triple null mutants in the MTL loci in C. glabrata as well as a strain over expressing type a information. We evaluated the growth phenotype of this set of mutants in response to different types of stress, on different media and temperatures. In the majority of media and temperatures used, we found no difference in the growth phenotype between the mutant strains and the wild-type. However, under osmotic and oxidative and replicational stress, strains that contain either no mating-type information, or only one type (either a or α) are more resistant than the wild type strain. We interpret this to mean that in our wild-type strain of C. glabrata some cells can form the a1/α2 heterodimer that represses some genes involved in the response to some types of stress. It is possible therefore that in C. glabrata the genes contained in the MTL loci participate in the response to certain types of stress which could allow C. glabrata to be a successful pathogen, that has recently acquired greater importance in the mammalian hosts."

Master thesis

Loci MTL Apareamiento Candida glabrata BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA BIOLOGÍA MOLECULAR

Expresión inducible de fusiones traduccionales de los genes MTL de Candida glabrata

YAMILE VIDAL AGUIAR (2016)

"La reproducción sexual y el control de la identidad del tipo celular sexual en la mayoría de los hongos está regulada por los genes codificados en el locus MAT (mating type locus) o MTL (mating type like) en otros hongos. Candida glabrata es una levadura haploide y asexual. Sin embargo, contiene en su genoma tres loci MTL en los cuales codifica los genes ortólogos a los que regulan el apareamiento en Saccharomyces cerevisiae, denominados a1, alfa1 y alfa2. El hecho de que C. glabrata haya conservado estos genes aun cuando no existan hasta el momento evidencias experimentales de reproducción sexual, plantea la pregunta de cuál es la función de estos genes en esta levadura. Para el estudio de la función de estos genes, hemos generado cuatro vectores replicativos en C. glabrata que nos permitirán construir fusiones traduccionales con dos epítopos diferentes (Flag o c-Myc) o con dos fluoróforos (mCherry o YFP), tanto en el extremo carboxilo como el amino de los genes de interés. Los vectores además contienen un promotor inducible, el del gen MET3 o del gen MT1, de manera que es posible etiquetar los genes de interés en cualquiera de los extremos e inducirlos mediante el crecimiento en medios específicos. Hemos generado diferentes fusiones traduccionales donde los genes codificados en los loci MTL ya se encuentran etiquetados en el extremo carboxilo y amino terminal con fluoróforos o epítopos de estos vectores. Con estas construcciones realizaremos ensayos para identificar la localización celular de las proteínas codificadas por estos genes (para los genes etiquetados con fluoróforos), así como estudios de interacción DNAproteínas (ChIP, ChIP-seq) e interacción entre proteínas (CoIP) mediante la coexpresión de diferentes genes etiquetados. Paralelamente, para realizar estudios de la función de estos genes hemos clonado los genes silvestres de interés (sin fusiones traduccionales) bajo el promotor inducible PMT1 para determinar el fenotipo de la sobreexpresión de cada uno de estos genes."

"Sexual reproduction in most fungi is controlled by genes encoded in the MAT locus (Mating Type Locus) or MTL (Mating-Type Like) in other fungi. In Saccharomyces cerevisiae these genes encode transcription factors involved in the establishment of the cell-type identity and regulation of mating. Candida glabrata is a haploid and asexual yeast that is an opportunistic pathogen of humans. However, it has orthologous genes to those that regulate mating in S. cerevisiae, called a1, alpha1 and alpha2 encoded in the MTL loci. The fact that C. glabrata has preserved these genes, even though there is no experimental evidence of sexual reproduction, raises the question of what is the role of these genes in this organism. To elucidate the function of these genes, we have generated four different replicative recipient vectors in C. glabrata, that allow us to generate translational fusions with two different epitopes (Flag or c-Myc) or two fluorophores (mCherry or YFP), at either the C or N-termini of the genes of interest. These plasmids are replicative in C. glabrata and have different selection markers to allow for selection of two plasmids in a single cell, and coexpression of two different tagged proteins. In addition the vectors contain one of two inducible promoters: the promoter of either MET3 or MT1 genes, so it is possible to tag the genes of interest at either end and induce the fusions by growing in specific media. We generated different translational fusions of the MTL genes at the carboxy and amino termini with both fluorophores and epitopes used in this work. We will use these fusions to identify the cellular localization of these proteins (in the case of genes tagged with fluorophores), as well as studies of DNA-protein interaction (ChIP, ChIP-seq) and protein-protein interactions by co-expression of different genes in the same cell (CoIP). In parallel, we have cloned each wild-type gene (with no epitope or fluorophore fusion) under the inducible promoter PMT1 to study the effect of the over-expression of these genes."

Master thesis

MTL Candida glabrata Fusiones traduccionales inducibles BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA BIOLOGÍA MOLECULAR

Candida glabrata encodes a longer variant of the mating type (MAT) alpha2 gene in the mating type-like MTL3 locus, which can form homodimers

KARINA ASYADE ROBLEDO MARQUEZ Ma. Guadalupe Gutiérrez Escobedo Patricia Yáñez Carrillo YAMILE VIDAL AGUIAR Marcela Cecilia Briones Martín del Campo Emmanuel Orta Zavalza Alejandro de las Peñas Nava Irene Beatriz Castaño Navarro (2016)

"The fungal pathogen Candida glabrata is a haploid asexual yeast. Candida glabrata contains orthologs of the genes that control mating and cell-type identity in other fungi, which encode putative transcription factors localized in the MAT locus in Saccharomyces cerevisiae or MTL in other fungi. Candida glabrata contains three copies of the CgMTL locus but only CgMTL1 correctly expresses the information encoded in it. CgMTL1 can encode the Cga1 gene (a information), or the Cgalpha1 and Cgalpha2 genes (alpha information). CgMTL2 contains an identical copy of the Cga1 gene. CgMTL3 contains an identical copy of the Cgalpha1 gene but a longer variant of the Cgalpha2 gene that we termed Cgalpha3. In S. cerevisiae diploid cells, that express Sca and Scalpha information, Sca1 and Scalpha2 proteins form a heterodimer, which represses genes expressed only in haploid cells and some genes involved in stress response. We constructed C. glabrata strains that simultaneously express Cga1 and Cgalpha2 or Cga1 and Cgalpha3 genes. We did not find any phenotype in these strains when grown under a large variety of stress and nutritional conditions. However, we detected an interaction between Cga1 and Cgalpha2 but not between Cga1 and Cgalpha3 by Bimolecular Fluorescence Complementation and co-immunoprecipitation assays."

Article

Candida glabrata Mating type-like loci (MTL) MTL-encoded genes Transcription factors Cga1-Cgalpha2 heterodimer Cgalpha3-Cgalpha3 homodimer BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA MICROBIOLOGÍA MICROBIOLOGÍA

Expresión y localización intracelular de las proteínas codificadas en los loci de apareamiento de Candida glabrata

PATRICIA YAÑEZ CARRILLO (2015)

"La reproducción sexual en hongos diploides es regulada por los genes codificados en el locus MAT (mating type), que determinan los tipos de apareamiento. A pesar de ser un organismo asexual, Candida glabrata posee tres loci de apareamiento: MTL1, MTL2 y MTL3 que contienen genes ortólogos a los necesarios para el apareamiento en Saccharomyces cerevisiae: alfa1, alfa2 y a1. Los genes alfa1 y alfa2 se encuentran en MTL1; alfa1 y alfa3 en MTL3 y, en dos aislados clínicos que poseen información alfa en MTL2, se encuentran los genes alfa1 y alfa4. Hemos econtrado que en C. glabrata existen tres alelos del gen alfa2: alfa2, alfa3 y alfa4, los tres poseen la secuencia homeodomino que en S. cerevisiae permite a las proteínas unirse al DNA para la regulación de sus genes blanco. Para estudiar la función de los loci MTL y la localización de las proteínas que codifican hemos generado vectores de expresión para fusiones traduccionales de cualquier gen de C. glabrata con tres secuencias de fluoróforos o epítopos. Encontramos que las proteínas alfa1 y alfa2 de C. glabrata se localizan en el núcleo, lo cual es congruente con su posible función como factores transcripcionales como sucede en otras levaduras. Al sobreexpresar los genes alfa de C. glabrata encontramos que las proteínas correspondientes se localizan tanto en el núcleo como en el citoplasma. En C. glabrata los genes alfa1 y alfa2 se inducen en condiciones de limitación de nutrientes y durante estrés osmótico independientemente de la información de aparemiento de los loci MTL. El gen a1 parece no expresarse en las condiciones de estrés nutricional de estrés osmótico. Los loci MTL1a y MTL1alfa de C. glabrata no complementan para el apareamiento en S. cerevisiae. La regulación de la expresión de los genes de apareamiento en C. glabrata es distinta a la descrita en S. cerevisiae y como trabajo futuro será determinar cuáles son los genes blanco que son regulados por genes codificados en los loci MTL de C. glabrata."

"Sexual reproduction in fungi is regulated by the genes encoded in the MAT (mating type) locus. Despite being an asexual organism, C. glabrata has three mating loci: MTL1, MTL2 and MTL3 containing the orthologous genes to those required for mating in Saccharomyces cerervisiae: alfa1, alfa2 y a1. alpha genes are distributed as follows in the genome: alpha1 and alpha2 are localized in MTL1; alpha1 and alpha3 in MTL3; and in only two clinical isolates in which we found alpha information in MTL2 we have alpha1 and alpha4 genes. We found that in C. glabrata there are three alpha2 alleles and all of them have a homeodomain sequences that allow DNA binding to regulate its target genes in the S. cerevisiae orthologues. To study the function of these genes and the localization of the respective proteins we generated expression vectors to generate translational fusions of any gene of C. glabrata with three fluorophores or epitopes sequences. C. glabrata alpha1 and alpha2 proteins are localized at the cell nucleus which is consistent with a possible role as transcriptional factors as in other yeasts. When alpha1 and alpha2 genes are overexpresed, we found that the proteins are localized not only in the nucleus but throughout the entire cell. In C. glabrata alpha1 and alpha2 genes are induced under conditions of nutrient limitation and during osmotic stress information regardless of the MTL aparemiento loci. The a1 gene promoter appears to be inactive under conditions of nutrient limitation and osmotic stress. C. glabrata MTL1a and MTL1alfa loci do not complement mating in S. cerevisiae. The regulation of gene expression in C. glabrata mating differs from that described in S. cerevisiae. As a future work we will determine which target genes are regulated by the MTL genes of C. glabrata."

Doctoral thesis

Candida glabrata Vectores de expresión Sobreexpresión fluoróforos y epítopos Apareamiento Genes alfa BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA BIOLOGÍA MOLECULAR

Cultivo del insecto comestible Comadia redtenbacheri Hammerschmidt en plantas de agave.

NORMA ESPINOSA GARCÍA (2018)

Tesis (Doctorado en Ciencias, especialista en Entomología y Acarología).- Colegio de Postgraduados, 2018.

El consumo del insecto comestible Comadia redtenbacheri (Hammerschmidt) conocido como “gusano rojo del maguey” aumentó en los últimos años, lo que ha llevado a una colecta excesiva de poblaciones silvestres de esta especie. Por ello, la presente investigación propone métodos para la infestación inducida de plantas de Agave salmiana en macetas con larvas de 0.12 g y mayores a 0.30 g de peso promedio a densidades de 20, 30 y 40 por planta, así como adultos recién emergidos en las proporciones hembra-macho 1:1, 1:2 y 2:1, además de plantas en el suelo con larvas de más de 0.30 g a densidades de 30, 60, 90 y 120. Las larvas de mayor peso en macetas a densidades de 30 y 40 individuos por planta, presentaron más capullos y emergencia de adultos. La proporción hembras-machos 1:2 tuvo un promedio de 12 larvas por planta y 75% de plantas infestadas. Con las larvas liberadas en el suelo a una densidad de 60 por planta, se logró el establecimiento de una segunda generación con 72% de plantas infestadas y 14.5% de daño promedio al interior del tallo. Los resultados obtenidos pueden servir de base para programas de producción o restablecimiento de poblaciones de gusano rojo. El mayor número de perforaciones en el tallo se presentó en la especie Agave salmiana variedad Manso, considerado el hospedero preferente de Comadia redtenbacheri. _______________ Comadia redtenbacheri HAMMERSCHMIDT FARMING IN AGAVE PLANTS. ABSTRACT: The consumption of the edible insect Comadia redtenbacheri (Hammerschmidt), known as “agave red worm”, has increased in recent years, which has caused an excessive collection from wild populations. This research proposes methods to induce their infestation in Agave salmiana plants in pots, with larvae of 0.12 g and greater than 0.30 g of weight, at densities of 20, 30 and 40 larvae per plant, as well as newly emerged adults at 1:1, 1:2, and 2:1 female: male ratios, and agave plants planted in pots with soil and larvae greater than 0.30 g at densities of 30, 60, 90 and 120 larvae per plant. The results indicate that in pots, larvae with the higher weight at 30 and 40 larvae per plant, produced the greatest number of pupae and adult emergence. Adults at 1:2 female-male ratio had an average of 12 larvae per plant and 75% of plants infested. The larvae released on pots with soil at densities of 60 larvae by plant, successfully became established and produced a second generation with 72% of plants internally infested, with an average of 14.5% of plant’s stem damage. The results obtained may serve as the basis for the production or population recovery programs of the agave red worm. The highest number of perforations in the stem occurred in the Agave salmiana (Manso), considered the preferred host of Comadia redtenbacheri.

Doctoral thesis

Gusano rojo Agave Infestación Apareamiento Entomofagia Redworm Infestation Mating Entomophagy Entomología y Acarología Doctorado BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA BIOLOGÍA DE INSECTOS (ENTOMOLOGÍA) DESARROLLO DE LOS INSECTOS

Caracterización de los genes MTL de Candida glabrata en Saccharomyces cerevisiae

KAREN JULIA NUÑEZ REZA (2016)

"La reproducción sexual se ha descrito como una ventaja evolutiva debido a la recombinación genética que podría favorecer una mejor adaptación. Por ello es importante el estudio de la regulación de la expresión de los genes que controlan el apareamiento, y la función de las proteínas codificadas por estos genes (Cgalfa1, Cgalfa2, Cgalfa3 y Cga1). Nuestro modelo de estudio, Candida glabrata, es una levadura patógena y asexual, que posee tres loci ortólogos (MTL1, MTL2 y MTL3) a los loci que regulan el apareamiento en la levadura sexual Saccharomyces cerevisiae. En este trabajo nos propusimos determinar si los genes codificados en los loci MTL de C. glabrata pueden complementar para la función de apareamiento, a mutantes de los genes ortólogos en S. cerevisiae. Mediante ensayos de complementación heteróloga observamos que las proteínas Cgalfa1, Cgalfa2, Cgalfa3 y Cga1 de C. glabrata no conservan la función para apareamiento de S. cerevisiae. Además, determinamos la actividad de los promotores de estos genes tanto en S. cerevisiae como en C. glabrata. Para ello construimos vectores que contienen fusiones transcripcionales de los promotores de los genes de C. glabrata con la proteína fluorescente YFP y encontramos que estos promotores se reconocen en S. cerevisiae. También determinamos que son activos en C. glabrata. Sin embargo, la actividad de estos promotores es menor en C. glabrata que en S. cerevisiae. Nuestros datos sugieren que la regulación y la función de las proteínas Cgalfa1, Cgalfa2, Cgalfa3 y a1 de C. glabarata podría ser diferente a la de S. cerevisiae."

"Sexual reproduction is thought to provide evolutionary advantage due to genetic recombination, which could provide better adaptation to environmental conditions. Therefore, it is important to study the regulation of expression of the genes that control mating, as well as the function of the proteins encoded in these genes (Cgalpha1, Cgalpha2, Cgalpha3 and Cga1). Our model organism, Candida glabrata, is an asexual fungal pathogen that contains three orthologous loci to the loci that control mating in the sexual yeast Saccharomyces cerevisiae (MTL1, MTL2 and MTL3). In this work we wanted to determine whether the genes encoded in the C. glabrata MTL loci complement the mating function in S. cerevisiae. We performed heterologous complementation assays and we found that the Cgalpha1, Cgalpha2 Cgalpha3 and Cga1 genes, are unable to complement, the mating function in mating-deficient S. cerevisiae strains. We also determine the promoter activity of these genes both in S. cerevisiae and in C. glabrata. To this end we made replicative vectors containing transcriptional fusions of each promoter with the yellow fluorescent protein YFP and found that the C. glabrata promoters are recognized in S. cerevisiae and they are also functional in C. glabrata, although the activity is higher in S. cerevisiae. Our data suggests that the regulation and the function of Cgalpha1, Cgalpha2, Cgalpha3 and Cga1 proteins are different from the role they have in mating in S. cerevisiae."

Master thesis

Candida glabrata Saccharomyces cerevisiae Complementación heteróloga Actividad de promotores Apareamiento, BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA BIOLOGÍA MOLECULAR

Desarrollo de Comadia redtenbacheri (Lepidoptera: Cossidae) en condiciones de laboratorio

KALINA MIRANDA PERKINS (2013)

Tesis (Doctorado en Ciencias, especialista en Entomología y Acarología).- Colegio de Postgraduados, 2013.

Comadia redtenbacheri, conocido como gusano rojo del maguey, es un insecto comestible sobreexplotado debido a su valor comercial, lo que ha originado interés por la conservación de las poblaciones silvestres y la formación de unidades de producción. Sin embargo, todavía existen grandes lagunas e información errónea para la identificación de la especie y en el estudio de su desarrollo. Para tratar de determinar qué factores son indispensables en la pupación y el apareamiento de la especie, bajo condiciones de confinamiento se establecieron una serie de experimentos. Se determinó que el sustrato más adecuado para su desarrollo pupal es la mezcla de suelo arenoso de las zonas de incidencia natural de la especie con vermiculita en la proporción 50:50. La humidificación del sustrato no tiene un efecto significativo. Al utilizar larvas sin manipulación comercial la emergencia de adultos aumenta significativamente con respecto a las manipuladas. Las larvas de quinto instar con peso de 0.30 a 0.39 g no presentan diferencias significativas en la probabilidad de emerger como adultos con respecto a las de mayor peso. La proporción de sexos, en su estado adulto, fue de 1.4:1.0 hembras a machos. Al realizar cruzas se detectaron diferencias de fecundidad entre las combinaciones 3:3, 2:1 y 3:1, con la media más alta en la primera de éstas, por lo que se infiere que al ir aumentando el número de individuos en igual proporción de hembras a machos, se obtendrán mejores resultados de oviposición. La segunda y tercera proporción de sexos presentan los niveles más bajos, efecto que se ve modificado al incrementar el número de machos. Con el objetivo de aumentar la precisión en el reconocimiento de C. redtenbacheri, se tomaron fotografías e imágenes en microscopio electrónico de barrido, de estructuras externas representativas de las etapas inmaduras y del adulto. _______________ DEVELOPMENT OF Comadia redtenbacheri (Lepidoptera: Cossidae) IN THE LABORATORY. ABSTRACT: Comadia redtenbacheri, known as the agave red worm, is an edible insect that has been overexploited because of its commercial value. Its value as a marketable good has awoken interest in preserving wild populations and in constructing production units. However, in identification of the species and in the study of their development there are large gaps and erroneous information. To determine which factors are essential to pupation and mating under conditions of confinement, a series of experiments were set up. We determined that the most suitable substrate for pupal development is the mixture of soil from areas of the species’ of natural incidence and vermiculite in a 50:50 proportion. Moisture in the substrate does not have a significant effect. When using larvae that had not been handled for commercial purposes, emergence of adults increases significantly, relative to those that had been handled. The larvae of the fifth instar, weighing 0.30 to 0.39 g, was not significantly different in the probability of emerge as adults from that of the sixth and seventh instars, 0.40 g or more. The proportion of sexes in the adult stage was 1.4:1.0 females to males. In breeding the insects there were differences in fecundity among the combinations 3:3, 1:2 and 1:3: the highest mean was achieved with the first proportion. This suggests that, when the number of females to equal to the number of males, better oviposition is obtained. The second and third proportions resulted in lower levels of oviposition, but as the number of males increased, so did oviposition. To increase precision in identification of C. redtenbacheri, photographs and electronic scanning microscope images were taken of the external structures representative of the immature and adult stages.

Doctoral thesis

Gusano rojo del maguey Pupa Cría de insectos comestibles Pupación Apareamiento Morfología externa Agave redworm Pupae Edible insect rearing Pupation Mating External morphology Entomología y Acarología Doctorado CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA