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Identificación morfológica y molecular de los fitopatógenos asociados al aguacatero en Michoacán, México

ANSELMO HERNANDEZ PEREZ (2016)

"Michoacán es el principal productor de aguacate en el mundo. Su cultivo se ve afectado por diferentes enfermedades. Por lo anterior el objetivo de este trabajo fue corroborar la presencia de patógenos asociados a la enfermedad de la tristeza del aguacatero. Se muestrearon raíces y suelo de árboles de aguacate con síntomas de la enfermedad en mención y se obtuvieron diferentes aislamientos en medio selectivo PARPH-V8®; la especie se determinó mediante la técnica de PCR. Se determinó la patogenicidad inoculando plántulas de aguacate. Para la evaluación de la tasa de crecimiento se realizó una regresión lineal y un ANOVA, se compararon las medias mediante la prueba Scheffe con el programa estadístico R 3.2. Para el porcentaje de inhibición, los resultados se sometieron a un análisis probit, se sometió a un ANOVA mediante un diseño experimental completamente al azar y se realizó la comparación de medias mediante la prueba de Scheffe, se analizaron los datos en el programa R 3.2. Se obtuvieron diferentes aislados: Phytopythium vexans, Pythium sp. amazonianum, Phytophthora cinnamomi, Mortierella elongata y Fusarium solani. De las pruebas de patogenicidad Phytopythium vexans, Pythium sp. amazonianum, Phytophthora cinnamomi y Mortierella elongata causan la sintomatología de la tristeza del aguacatero. Phytopythium vexans, Pythium sp. amazonianum son más agresivas en tasa de crecimiento y en el medio selectivo PARPH se logra aislar a Phytopythium vexans, Pythium sp. amazonianum. Se concluye que existe un complejo de fitopatógenos asociados a la enfermedad en mención (Phytopythium vexans, Pythium sp. amazonianum, Phytophthora cinnamomi, Mortierella elongata) y se reporta que los Oomicetos aislados son nuevos géneros altamente resistentes al Hymexazol."

Abstract: Michoacan is the main avocado producer state in Mexico and the World. This cultivar undergoes different diseases. The goal of this thesis was to demonstrate the presence of some associated patogens in the sadness disease. Roots and abearing diseasel symptoms avocado trees were samped. Different Isolation were obtained in selective environment named PARPH-V8®; the specie was identified using the PCR technique the pathogenicity was determined by inoculating the avocado seedlings. In order to assess the growth rate a liveal regression an ANOVA were utilized. The different means were compared utilizing the Scheffe test with the statistics program R 3.2. concerning the Inhibition rates, the outcomes were subhected to to a Provit analysis an ANOVA was used by mean of an experiemental design wholly at randon. We compare the different means utilizinga the Sheffe test, and the data coming from program R 3.2 were analyzed. Different isolations were obtained such as Phytopythium vexans, Pythium sp. amazonianum, Phytophthora cinnamomi, Mortierella elongata an Fusarium solani. Deeming the pathogenecity tests we may say that Phytopythium vexans, Pythium sp. amazonianum, Phytophthora cinnamomi and Mortierella elongata cause the symptomology of avocado’s saddness. Phytopythium vexans, Pythium sp. amazonianum are more aggressive koncerning the rate of grounth. In the selective environment PARPh Phytopythium vexans and Pythium sp. amazonianum are isolated. It is concluded that there is a cluster of complex phytopathogens agents linked to the above mentioned illness: Phytopythium vexans, Pythium sp. amazonianum, Phytophthora cinnamomi, Mortierella elongata. His also reported that some isolated Oomicetes are new genders highly resistant to Hymexazol.

Master thesis

Identificación molecular Phytopythium vexans Aguacate CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Caracterización de hongos entomopatogenos, agentes de control biológico de diaphorina citri

LIVIER GUIZAR GUZMÁN (2013)

"Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae antes Psyllidae)), es de las plagas más importantes de los cítricos por ser vector de la bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus, la cual causa la enfermedad llamada Huanglongbing; su presencia en México, representa una seria amenaza para 526 mil hectáreas de cítricos. D. citri es atacada por diversas especies de hongos entomopatógenos, incluyendo a las del género Metarhizium (Ascomycota: Cordycipitales), que son hongos del suelo, patógenos facultativos de insectos de más de 200 especies, incluyendo D. citri. En el presente estudio, en busca de especímenes infectados con hongos entomopatógenos, se colectaron adultos vivosde este insecto en los municipios de Papantla y Tlapacoyan, en el Estado de Veracruz, México, obtenidos de limón persa (Citrus latifolia) y limonaria(Murraya paniculata), las muestras obtenidas se mantuvieron en laboratorio en cámara húmeda. Se detectó e identificó una especie del género Entomophthora Cohn sensu stricto (Entomophthoromycota: Entomophthorales) infectando 1.4% de insectos adultos. D. citri es un nuevo registro de hospedero a nivel mundial para este género de hongos entomopatógenos. Los caracteres utilizados para la identificación y clasificación de especies de los hongos entomopatógenos (Ascomycota: Hypocreales) son ambiguos la mayoría son casi exclusivamente anamórficos, lo que complica definir la diversidad genética intra- e interespecífica. Estudios moleculares recientes han revelado que M. anisopliae es un complejo de especies que contiene al menos nueve diferentes taxones. En este estudio se reporta por primera vez la presencia de M. robertsii en los Estados de Coahuila, Nuevo León, Veracruz y San Luis Potosí y M. brunneum “alterno” en Tabasco, Chiapas, Colima y Tamaulipas, México"

"Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae (before Psyllidae)), is one of the most important citrus pests; such insect is a vector of the bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus, which is the puntative agent of the disease called Huanglongbing. Its ocurrence to Mexico, represents a serious threat to526 000 hectares of citrus. D. citri is attacked by various species of entomopathogenic fungi, including the genus Metarhizium (Ascomycota: Codycipitales), which is a soil fungus, and insect pathogen of over 200 species, including D. citri. In the present study, live adults of this insect living in the municipalities of Papantla and Tlapacoyan, in the State of Veracruz, Mexico were collected for infection with entomopathogenic fungi, obtained from Persian lime (Citrus latifolia) and orange Jasmine (Murraya paniculata), samples were kept in humid chambers in the laboratory. A species of Entomophthora sensu stricto Cohn (Entomophthoromycota: Entomophthorales) was detected and identified infecting 1.4% of adult insects. D. citri is a new host world record for this genus of entomopathogenic fungus. Characters used for identification and classification of species of entomopathogenic fungi (Ascomycota: Hypocreales) are ambiguous, since most are almost exclusively anamorphic, complicating to define intra- and interspecific genetic diversity. Recent molecular studies have revealed that M. anisopliae is a species complex that contains at least nine different species many morphologically identical. In this study, we report for the first time the presence of M. robertsii in the States of Coahuila, Nuevo Leon, Veracruz and San Luis Potosi and M. brunneum "alternate" in Tabasco, Chiapas, Colima and Tamaulipas, Mexico"

Master thesis

Especies Moleculares Hospederos CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Diseño de un sistema de expresión de proteínas recombinantes del virus de influenza A (H7N9) en Bacillus subtilis

MARCO ANTONIO PEREYRA CAMACHO (2016)

"La influenza es una enfermedad infecciosa provocada por el virus de la influenza, sus principales hospederos son las aves silvestres, sin embargo, puede infectar personas, aves de corral, cerdos y otros animales. Actualmente el virus de la influenza A (H7N9) forma parte de un subgrupo de virus gripales que normalmente circulan en las aves, sin embargo, recientemente se ha reportado la aparición de graves epidemias humanas causadas por este virus. Esto ha generado la necesidad de desarrollar nuevas alternativas para la producción de vacunas candidatas. Los estudios más recientes muestran que la producción de proteínas recombinantes es una estrategia viable para dicho propósito. El presente trabajo tiene la finalidad de desarrollar un sistema de expresión de proteínas recombinantes de influenza A (H7N9) en Bacillus subtilis. Debido a que se disponen de pocos vectores de expresión para B. subtilis, en este trabajo se diseñó un sistema de expresión bajo el promotor del fago T7. El sistema consiste en un vector replicativo que contiene los genes de las proteínas virales hemaglutinina (HA), neuraminidasa (NA) y de matriz (M1). Además, el vector cuenta con un péptido señal perteneciente a la vía de secreción TAT. La funcionalidad del sistema de expresión y secreción se evaluó mediante análisis por western blot y microscopía de fluorescencia utilizando el gen reportero de la proteína verde fluorescente. Posteriormente se utilizará para la producción de proteínas del virus de influenza A (H7N9)."

"Influenza is an infectious disease caused by the influenza virus, its main hosts are wild birds, but can infect people, poultry, pigs and other animals. Currently the influenza A virus (H7N9) is part of a subgroup of influenza viruses that normally circulate in poultry, however, it has recently been reported the occurrence of serious human epidemics caused by this virus. This has created the need for development of new alternatives for the production of vaccine candidates. The most recent studies show that the production of recombinant proteins is a viable strategy for that purpose. This study aims to develop an expression system for recombinant proteins of influenza A (H7N9) in Bacillus subtilis. Because there are few expression vectors for B. subtilis, in this work we designed an expression system under the T7 phage promoter. The system consists of a replicative vector containing the genes of viral proteins hemagglutinin (HA), neuraminidase (NA) and matrix (M1). Furthermore, the vector has a signal peptide belonging to the TAT secretion pathway. System expression functionality and secretion were assessed by western blot analysis and fluorescence microscopy using the reporter gene green fluorescent protein. Subsequently it will be used for the production of proteins of influenza A (H7N9)."

Master thesis

B. subtilis Iinfluenza Proteínas recombinantes Secreción T7 BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA BIOLOGÍA MOLECULAR BIOLOGÍA MOLECULAR

Especies de fusarium asociadas a la pudrición basal del ajo en el centro norte de México y su patogenicidad

JUAN CARLOS DELGADO ORTIZ (2013)

"En México la superficie sembrada para el cultivo del ajo es poco menos de 5,452 ha; los estados de Zacatecas, Guanajuato y Aguascalientes aportan más del 66% de la producción nacional, siendo Zacatecas el principal productor a nivel nacional. En el mundo la presencia de hongos, bacterias, virus y nematodos en los sistemas de producción de ajo ocasionan una serie de enfermedades, que dependiendo de la severidad con que se presenten causan un amplio impacto económico. Entre los hongos de suelo que provocan enfermedades en el cultivo de cebolla y ajo se encuentran diversas especies de Fusarium, que ocasionan la pudrición basal del bulbo de cebolla (Fusarium oxysporum f. s.p. cepae) y del ajo (Fusarium culmorum); provocando coloraciones café en las puntas de las hojas, que se tornan rojizas o púrpura y que se extienden hasta la base de las hojas, causando enanismo en la planta, bulbos esponjosos y una coloración ocasional purpura, los tallos presentan consistencia blanda y las raíces con coloraciones de color café a rojo. Esta investigación tiene como objetivo identificar morfológicamente y molecularmente las especies de Fusarium asociados a la pudrición basal en el centro norte de México y evaluar su patogenicidad. Se realizaron muestreos en las zonas productoras de ajo en los estados de Zacatecas, Guanajuato y Aguascalientes. De estos se aislaron e identificaron morfológicamente hasta el nivel de genero con las claves de Barnett and Hunter (1998) mientras que para especie se emplearon las claves de Domsch et al., (1980); Nelson et al., (1983) y Leslie y Summerell, (2006). La identificación molecular se realizó por medio de PCR con iniciadores específicos para cada especie, mientras que las especies que no se identificaron con los iniciadores específicos fueron identificadas mediante los ITS1/ITS4. Lográndose identificar las especies de Fusarium: F. oxysporum, F. proliferatum, F. verticillioides, F. acuminatum y F. solani, de las cuales se evaluó su patogenicidad en invernadero, inoculando plantas las cuales presentaban tres hojas verdaderas con cepas seleccionadas al azar; siendo 5 cepas de F. oxysporum, 4 de F. proliferatum y 1 de F. solani las que mostraron mayor patogenicidad."

"In Mexico the area planted with the crop of garlic is slightly less than 5,452 ha, the states of Zacatecas, Guanajuato and Aguascalientes contribute more than 66 % of domestic production, being the main producer Zacatecas nationwide. In the world the presence of fungi , bacteria, viruses and nematodes in garlic production systems cause a variety of diseases , depending on the severity with which arise cause a wide economic impact. Between soil fungi which cause diseases in growing onions and garlic are various species of Fusarium, basal rot causing onion bulb (Fusarium oxysporum f sp cepa) and garlic (Fusarium culmorum); causing the coffee stains tips of the leaves, which turn reddish or purple and extending to the base of the leaves, causing stunting plant bulbs occasional fluffy and purple color, have soft consistency stems and roots with a brown coloration red. This research aims to identify morphologically and molecularly Fusarium species associated with basal rot in north central Mexico and evaluate their pathogenicity. Were sampled in garlic-producing areas in the states of Zacatecas, Guanajuato and Aguascalientes. These were isolated and identified morphologically to genus level keys Barnett and Hunter (1998) while for species were used keys Domsch et al. (1980 ), Nelson et al. (1983), and Leslie and Summerell, (2006). Molecular identification was performed by PCR using specific primers for each species, while species not identified with specific primers were identified by the ITS1/ITS4. Fusarium species identified: F. oxysporum , F. proliferatum , F. verticillioides , F. solani and F. acuminatum, from which was evaluated in a greenhouse for pathogenicity by inoculating plants which were three true leaves with strains selected at random , being 5 strains of F. oxysporum, 4 of F. proliferatum and 1of F. solani which showed higher pathogenicity."

Master thesis

Especies de Fusarium Patogenicidad Identificación morfológica Identificación molecular CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Estudio de los mecanismos de desacoplamiento fisiológico mitocondrial de los crustáceos

CHRYSTIAN MARIANA RODRIGUEZ ARMENTA (2018)

Las especies de crustáceos Artemia franciscana y Litopenaeus vannamei son capaces de sobrevivir a cambios en la concentración de oxígeno disuelto en el agua, presentando un ajuste metabólico regulando su función mitocondrial. El objetivo de este estudio fue determinar en las mitocondrias de ambas especies, la presencia de MDM como la TP y/o

las enzimas alternas en dos estadios del ciclo de vida y en condiciones de estrés oxidativo. La TP se evaluó en mitocondrias aisladas de cada especie utilizando diferentes iones como inductores sobre el consumo de oxígeno mitocondrial, se determinó la captación de calcio exógeno, hinchamiento mitocondrial y el m. Para detectar la presencia de enzimas alternas en la cadena respiratoria de ambas especies se evaluó la actividad en gel de los complejos respiratorios, el consumo de oxígeno mitocondrial, un análisis western blot y se analizaron mediante LC-MS/MS

para confirmar su identidad. Los resultados confirman que las mitocondrias de ambas especies no manifiestan un

estado de TP, pues tienen la habilidad de captar gran cantidad de calcio y otros iones, no se observó hinchamiento mitocondrial y el m no colapsó; lo anterior sugiere una característica adaptativa de sobrevivencia a condiciones ambientales cambiantes. Además, se detectaron una glicerol fosfato deshidrogenasa en las mitocondrias de

nauplios y adultos de artemia, y una oxidasa alterna en la etapa de nauplio. En el camarón no se detectaron enzimas alternas en ningún estadio evaluado, ni por efecto de la hipoxia-reoxigenación. Esto sugiere que la artemia presenta diferentes mecanismos adaptativos para sobrellevar los cambios en la concentración de oxígeno ambiental

durante su ciclo de vida. Palabras clave: cadena respiratoria mitocondrial, crustáceos, enzimas oxidorreductasas

alternas, hipoxia, mecanismo de desacoplamiento mitocondrial, mitocondria.

reoxigenación, transición de la permeabilidad mitocondrial.

Doctoral thesis

: Tecnología de alimentos de origen animal BIOLOGÍA Y QUÍMICA QUÍMICA BIOQUÍMICA BIOLOGÍA MOLECULAR BIOLOGÍA MOLECULAR

Asociación entre marcadores genéticos y caracteres de interés agronómico en la colección nacional de trigo

MARIA DEL PILAR SUASTE FRANCO (2014)

"En la búsqueda de diversidad para incluir en los programas de mejoramiento es de gran importancia el estudio de la colección nacional de trigo como fuente donadora de genes y con base en el comportamiento genotípico y fenotípico de sus accesiones detectar las asociaciones de importancia entre ambos caracteres, agrupar individuos con fondos genéticos similares para características de interés agronómico y detectar la posibilidad de efectos pleiotrópicos en los alelos estudiados. Para la evaluación de los caracteres fenotípicos, el ensayo se estableció en Nanacamilpa, Tlax. y Roque, Gto.; durante dos ciclos en cada localidad, Otoño-Invierno (O-I) 2010-2011 y 2011- 2012 en Roque, y Primavera-Verano (P-V) 2011 y 2012 en Nanacamilpa. Para las variables genotípicas se usaron 16 marcadores moleculares previamente asociados a diferentes características de interés en trigo: royas (Lr68, Lr34, vii Lr46 y Sr2), gluteninas (Glu-A1b, Glu-B1al y Glu-D1), altura de planta (Rht-B1 y Rht-D1), fotoperiodo (Ppd-D1a), vernalización (Vrn-A1, Vrn-B1 y Vrv-D1a), dureza del grano (PinA-D1a y PinB-D1a) y almidón (GBSS). Las medias de los caracteres fenotípicos se conjuntaron con los resultados de los marcadores y se analizaron mediante un análisis de conglomerados, usando el método de Ward (1963). Se formaron 12 grupos, siendo las variedades del grupo 5 las más precoces, con un ciclo medio a floración y madurez de 74.8 y 118.6 dds respectivamente. Las variedades más tardías están ubicadas en el grupo 6 (sin alelos Ppd-D1) con una diferencia de hasta 14.3 días en el ciclo a madurez. En general, los grupos 3, 4 y 12 poseen variedades con características deseables (precocidad, resistencia a enfermedades y calidad industrial). Se aplicó la prueba de Kruskal-Wallis para determinar la asociación entre caracteres fenotípicos y marcadores moleculares. Se ha reportado previamente que los marcadores GBSS, Glu-A1b, Glu-B1al y PinA y B-D1a, son específicos a ciertos caracteres propios de la calidad de harina y masa de trigo; en el presente estudio no se detectó significancia con las variables fenotípicas aquí evaluadas; sin embargo, para el marcador Sr2 se detectaron diferencias con la variable DF; con Ppd-D1a y la variable AP; Rht-D1 para las variables DF y DM; y Glu-D1 para DF, DM y AP, de tal forma que se puede asumir la posibilidad de pleiotropía para estos cuatro genes, los cuales para las variedades de la Colección Nacional podrían influir en caracteres donde no se había reportado asociación."

"The national collection of wheat is of great importance as donor source of genes in seeking diversity to include in the breeding programs and to detect important associations between genotypic and phenotypic characters based on the assessment of its accessions, grouping individuals with similar genetic backgrounds for characteristics of agronomic interest and detecting eventual pleiotropic effects between the studied alleles. For the evaluation of phenotypic characters, the trial was established at Nanacamilpa, Tlax. and Roque, Gto.; during two cycles in each locality, Autumn -Winter (O-I) 2010-2011 and 20112012 in Roque; and Spring-Summer (P-V) 2011 and 2012 in Nanacamilpa. For genotypic traits 16 molecular markers previously associated with different characteristics in wheat were used: rusts (Lr68, Lr34, Lr46 and Sr2), glutenins (Glu-A1b, Glu-D1 and Glu-B1al), plant height (Rht-B1 and Rht-D1), photoperiod ix (Ppd-D1a), vernalization (Vrn-A1, Vrn-B1 and Vrv-D1a), kernel hardness (PinA-D1a and PinB-D1a) and starch (GBSS). Means of phenotypic characters were combined with results of markers and analyzed by cluster analysis, using the method of Ward (1963). Twelvw groups were formed with varieties of group 5 as the earliest ones, with a mean cycle to flowering and maturity of 74.8 and 118.6 days after planting respectively. The latest varieties are included into Group 6 (with no Ppd-D1 alleles) with a difference of up to 14.3 days in the cycle to maturity. In general groups 3, 4 and 12 possess varieties with desirable characteristics (earliness, disease resistance and industrial quality). KruskalWallis test was applied to determine the association between phenotypic characters and molecular markers. It has been previously reported that markers GBSS, Glu-A1b, Glu-B1al and PinA and B-D1a, are specific to certain characters relted to quality of flour and wheat dough; also, in this study no significance was detected with phenotypic traits evaluated; however, for marker Sr2 differences were detected with variable DF; Ppd-D1a and variable AP; RhtD1 for variables DF and DM, and Glu-D1 for DF, DM and AP, so that pleiotropy cannot be assumed as a possibility for those four genes, which could influence over characters where no associations have been yet reported in varieties of the National Collection

Master thesis

Genotipo Marcadores moleculares Pleiotropía CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Evaluación de niveles de expresión de la proteína beta-lactoglobulina en leche de vaca Jersey

MARTHA ANGELICA TELLO SANCHEZ (2020)

La leche materna provee los requerimientos nutricionales para el desarrollo infantil, no obstante, en México, el consumo de fórmulas infantiles (FI) aumenta 5.5 % anualmente. Las FI se fabrican mayormente con leche de bovino, que tiene diferencias importantes en proteínas como caseínas, α-lactoalbúmina y β-lactoglobulina (β-Lg). La β-Lg no está presente en la leche humana, por ello es uno de los principales alérgenos en leche bovina. Existen alrededor de 12 variantes genéticas, con pesos moleculares y puntos isoeléctricos muy similares, A y B son las más comunes. La respuesta inmune, mayormente a la variante A, puede causar desórdenes gastrointestinales, alteraciones en la proliferación celular y diabetes infantil tipo 2. El objetivo de este trabajo es la purificación, identificación e inmunodetección de las variantes de β-Lg en leche de vaca Jersey y el desarrollo de una técnica para la genotipificación del ganado. El esquema de purificación diseñado se aplicó a leche cruda. La cuantificación de proteínas por el método fluoromético Qubit y se probaron tres métodos electroforéticos para la separación de las variantes. Se llevaron a cabo la inmunodetección de β-Lg y su variante B y la genotipificación por la longitud de los fragmentos de restricción de los polimorfismos (PCR-RFLP) por digestión con la enzima HaeIII. Mediante la estrategia de purificación, se obtuvo un concentrado de proteínas de suero con 83 % de β-Lg. La separación de dos bandas cercanas a 18.4 kDa, peso molecular de la β-Lg, se logró por SDS-PAGE con geles de gradiente. La inmunodetección confirmó que las bandas obtenidas correspondían a las variantes de β-Lg, sin embargo no fue posible la distinción por la detección de la variante B. Con muestras de DNA genómico se obtuvo un producto de amplificación de 252 pb (Exón IV del gen β-Lg). La digestión con HaeIII reveló que el genotipo de mayor frecuencia fue el heterocigoto AB con un 45 %. Este trabajo permitió sentar las bases para desarrollar un método de identificación y diferenciación de las variantes genéticas de β-Lg en ganado, generando la oportunidad de continuar investigaciones para su estandarización y aplicación como método de rutina a nivel industrial.

Master thesis

CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA QUÍMICA BIOLOGÍA MOLECULAR

Patogénesis de colletotrichum truncatum causante de antracnosis en papaya maradol

INDIRA ROJO BAEZ (2017)

RESUMEN

Colletotrichum truncatum es un hongo fitopatógeno causante de antracnosis en distintos hospedantes. En papaya (Carica papaya L.), la antracnosis es responsable de pérdidas postcosecha y presenta una incidencia del 40% en México. De acuerdo a su hospedante, C. truncatum utiliza distintas estrategias de infección: la estrategia intracelular en chícharo y lenteja, entre otros; y la estrategia intramural subcuticular en chile; sin embargo, el proceso y la estrategia de infección que ocasiona este patógeno en papaya es desconocido. El objetivo de esta investigación fue analizar el proceso de patogénesis de C. truncatum en papaya Maradol mediante técnicas histológicas y moleculares. Se inocularon hojas y frutos de papaya Maradol con una suspensión de 10 μL a una concentración de 1 x 106 esporas/mL del patógeno y se colectó tejido vegetal a las 0, 2, 6, 16, 20, 24, 48, 60, 72, 96 y 120 horas después de inoculación (hdi). La técnica histológica consistió en fijación con FAA, tinciones diferenciales de safranina-verde rápido, y observación mediante microscopía óptica. Por su parte, el análisis de expresión génica consistió en la medición de los niveles de expresión temporal de los genes de interés (CUT1, GLS1 y CHS1) mediante PCR en tiempo real y el método 2-ΔΔCt. En las primeras horas después de inoculación (2-24 hdi), se observó la germinación de los conidios mediante tubos germinativos, así como la producción de apresorios melanizados; se elevaron los niveles de transcritos de los genes β-1-3 glucan sintasa (GLS1) y quitin sintasa (CHS1) e inició la expresión del gen cutinasa (CUT1). En el lapso de 24 a 72 hdi se observó colonización por parte del patógeno, se expresaron los genes CUT1, GLS1 y CHS1; de las 96 a 120 hdi se observaron hifas secundarias de infección y formación de acérvulos; se elevaron los niveles de transcrito de los genes CUT1, GLS1 y CHS1. En conclusión, C. truncatum utiliza la estrategia de colonización intramural subcuticular en hoja y fruto de papaya Maradol

Doctoral thesis

BIOLOGÍA Y QUÍMICA QUÍMICA BIOQUÍMICA BIOLOGÍA MOLECULAR BIOLOGÍA MOLECULAR

ANÁLISIS FARMACOGNÓSTICO Y MOLECULAR DE Turnera diffusa var. aphrodisiaca y Turnera diffusa var. diffusa Willd. Ex. Schult

KARLA MARINA BAEZ PARRA (2019)

La damiana mexicana (Turnera diffusa Willd. Ex. Schult), se utiliza en la medicina tradicional como hipoglucemiante, tranquilizante, control de síntomas de la menopausia, infecciones genito-urinarias y afrodisíaco, este último uso es el más popular y por el cual, específicamente la damiana de California tiene una gran demanda tanto nacional e internacionalmente. Sin embargo, su comercialización se ha visto afectada por la adulteración de sus productos, debido a la falta de mecanismos de identificación e información limitada sobre las diferencias entre las variedades actualmente conocidas. El objetivo de este estudio fue elaborar una monografía con bases científicas, de hojas de las variedades aphrodisiaca y diffusa de Turnera diffusa, cultivadas bajo las mismas condiciones. Una monografía de plantas medicinales consta de parámetros para su control de calidad y la comprobación de sus principios activos terapéuticos, por ello, este trabajo se dividió en dos etapas: una etapa descriptiva, donde, se realizaron los estudios para determinar parámetros de control de calidad, a nivel macroscópico y microscópico, se obtuvo un perfil cromatográfico por HPTLC (cromatografía de capa fina de alta resolución) de extractos metanólicos y hexánicos de cada variedad, además se analizaron los perfiles genéticos, por marcadores de ADN denominados ISRRs (Inter Secuencias Simple Repetidas). En los resultados obtenidos, las hojas de la var. difusa fueron dos veces más grandes que las de la variedad aphrodisiaca. Se observó mayor densidad de tricomas glandulares en la var. aphrodisiaca. Las hojas de ambas variedades son dorsiventrales e hipostomáticas con estomas paracíticos. En los perfiles por HPTLC, para el extracto metanólico se obtuvieron diez picos para la var. aphrodisiaca y ocho para la var. diffusa, las bandas fueron de coloraciones amarillas a naranja las cuales pertenecen a flavonoides, mientras que en los perfiles del extracto hexánico se observaron bandas en coloraciones violetas, lo que indica la presencia de terpenos, mientras que en el cromatograma se obtuvieron nueve picos para cada variedad, con diferencias en los tiempos de retención y altura.

Doctoral thesis

Ciencia y tecnología para productos agrícolas de zonas tropicales y subtropicales BIOLOGÍA Y QUÍMICA QUÍMICA BIOQUÍMICA BIOLOGÍA MOLECULAR BIOLOGÍA MOLECULAR