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Identificación molecular de heces y análisis de hábitos alimenticios de carnívoros en la reserva de la biósfera "Sierra del Abra Tanchipa", San Luis Potosí, México

HECTOR EDUARDO BENITEZ ALEMAN (2014)

Tesis (Maestría en Ciencias, especialista en Ganadería).- Colegio de Postgraduados, 2014.

La identificación precisa de heces de carnívoros silvestres es importante para describir sus hábitos alimenticios, sobre todo en aquellas especies elusivas o en riesgo. Sin embargo Identificar las heces de especies de carnívoros simpátricos no es una tarea sencilla. Por ello, las técnicas moleculares, son herramientas que brindan mayor precisión en la identificación de heces. El análisis de hábitos alimenticios aporta información valiosa para entender la estructura poblacional de los depredadores y sus presas, así como su importancia ecológica para generar estrategias de manejo y conservación de carnívoros y sus presas. Los objetivos de este estudio fueron identificar las heces de carnívoros extrayendo ADN mitocondrial de estas y amplificando un fragmento del gen citocromo b mediante un protocolo basado en la reacción en cadena de la polimerasa y polimorfismos en la longitud de los fragmentos de restricción (PCR-RFLP), así como analizar su contenido para la identificación de presas consumidas. Con el PCR-RFLP se identificaron 108 muestras de 125 recolectadas en campo, de ellas, 82 fueron de ocelote (Leopardus pardalis), 11 de zorra gris (Urocyon cinereoargenteus), 6 de puma (Puma concolor), 6 de jaguarundi (Puma yagouaroundi) y 3 de margay (Leopardus wiedii) respectivamente. En general, las especies presa consumidas fueron mamíferos menores a 2 kg. Las presas más importantes para el ocelote fueron el conejo (Sylvilagus floridanus), para el puma el venado cola blanca (Odocoileus virginianus). El índice estandarizado de la amplitud del nicho de Levins, indicó que el tigrillo fue el consumidor más especializado, mientras que el índice de Pianka identificó que el ocelote y la zorra gris presentaron el mayor solapamiento (0.78) compartiendo notablemente su preferencia por el conejo. Este trabajo es el primero realizado para identificar la dieta de pequeños carnívoros en la RBSAT y servirá como base para generar estrategias de conservación y manejo de estos carnívoros. _______________ MOLECULAR IDENTIFICATION OF FECES AND ANALYSIS OF CARNIVORE FOOD HABITS IN "SIERRA DEL ABRA TANCHIPA” BIOSPHERE RESERVE, SAN LUIS POTOSI, MEXICO. ABSTRACT: Accurate identification of feces of wild carnivores is important to describe their food habits, especially those at risk or elusive species. However, morphometric identification of feces like those of sympatric carnivores is not easy. Therefore, molecular techniques are tools that provide greater accuracy in identifying stool. Analysis of food habits provides valuable information to understand the population structure of predators and prey, as well as its ecological importance to develop management and conservation strategies of carnivores and their prey. The objectives of this study were to identify the feces of carnivores extracting mitochondrial DNA and amplifying a fragment of the cytochrome b gene using a protocol based in the polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism (PCR- RFLP) and analysis content for the identification of prey consumed. With the PCR-RFLP, we identified 108 of 125 scats collected in the study area, of which, 82 were of ocelot (Leopardus pardalis), 11 of gray fox (Urocyon cinereoargenteus), 6 of puma (Puma concolor), 6 of jaguarundi (Puma yagouaroundi), and 3 of margay (Leopardus wiedii), respectively. In general, the most common prey mammals consumed were lower than 2 kg. The most important prey for ocelot was the rabbit (Sylvilagus floridanus), and white-tailed deer for puma (Odocoileus virginianus). The standardized index of niche breadth of Levins results suggest that the ocelot was a specialist consumer, whilst the index of Pianka identified that the ocelot and the gray fox showed the higher overlap (0.78) markedly sharing their preference for rabbit. This work is the first study to identify the diet of small carnivores in RBSAT and serve as the basis for generating conservation strategies and management of these carnivores.

Master thesis

ADN mitocrondrial Citocromo b PCR-RFLP Hábitos alimenticios Carnívoros Mitochondrial DNA Cytochrome b Food habits Carnivores Ganadería Maestría CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Síntesis de heterociclos intercaladores con el ADN

LUIS ALFREDO SOLANO CAUDILLO MIGUEL ANGEL VAZQUEZ GUEVARA (2015)

Las moléculas intercaladoras con el ADN son moléculas interesantes desde el punto de vista medicinal. En la actualidad se sigue estudiando sobre la síntesis de dichas moléculas, por lo cual, este proyecto se enfocó a encontrar y estudiar diferentes condiciones de reacción para obtener compuestos con posible actividad intercaladora con el ADN. La reacción por la cual se pretendió llevar a cabo la formación de estos heterociclos derivados del benzofurano fue mediante una reacción por multicomponentes. Se variaron las condiciones de reacción: disolvente, base y temperatura para llevar a cabo la transformación de dichas materias primas. Se obtuvieron satisfactoriamente los derivados del 2-(2-hidroxibenciliden) malononitrilo (materia prima). En la siguiente etapa de reacción enfocada en la obtención del producto objetivo, se variaron condiciones de reacción observándose la transformación de las materias primas pero el producto obtenido no fue totalmente caracterizado por diferentes técnicas espectroscópicas (RMN) quedando como perspectiva del trabajo.

The embedding molecules in DNA are interesting structures from the medical point of view. Today is still being studied on the synthesis and activity of these molecules; thus, this project focused to find and study different reaction conditions to obtain compounds with potential activity with DNA intercalating. The reaction by which it is intended to conduct the formation of these heterocycles benzofuran derivatives is by multicomponent reaction. The reaction conditions were varied: solvent, base and temperature to carry out the transformation of these raw materials. They obtained satisfactorily derivatives of 2- (2-hydroxybenzylidene) malononitrile (raw material). In the next reaction step focused on obtaining the target product, reaction conditions were varied, observed transformation of the raw materials but the product obtained was not fully characterized by various spectroscopic techniques (NMR) remaining as labor perspective

Article

BIOLOGÍA Y QUÍMICA Multicomponente Intercalación Isonitrilos Benzofurano ADN

Tauromaquia Topológica

ENRIQUE CASTAÑEDA ALVARADO (2007)

En este artículo acercamos al lector a esa maravillosa área de las matemáticas que llamamos topología, mediante algunos tópicos que platicamos de una forma accesible, divertida y sin ningún rigor matemático. Los tópicos que se abordan son conexidad, la banda de Möbius, la teoría de nudos y su aplicación a la biología molecular y finalmente hablamos de la conjetura de Poincaré.

En este artículo acercamos al lector a esa maravillosa área de las matemáticas que llamamos topología, mediante algunos típicos que platicamos de una forma accesible, divertida y sin ningún rigor matemático. Los tópicos que se abordan son conexidad, la banda de Möbius, la teorÌa de nudos y su aplicación a la biología molecular y finalmente hablamos de la conjetura de Poincaré.

Article

Multidisciplinarias (Ciencias Sociales) topología conexidad banda de Möbius nudos ADN conjetura de Poincaré CIENCIAS SOCIALES

Identificación de alelos polimórficos en el gen leptina de ovinos Katahdin

EDGAR VALENCIA FRANCO (2016)

Tesis (Doctorado en Ciencias, especialista en Ganadería).- Colegio de Postgraduados, 2016.

El gen leptina se encuentra en el cuarto cromosoma del genoma ovino y bovino. Su receptor presenta seis isoformas a partir de un mismo ARNm. Se han identificado receptores para la hormona leptina en el hipotálamo y otros tejidos periféricos. La hormona leptina, participa en procesos fisiológicos relacionados con la regulación del metabolismo energético, consumo de alimento, deposición de grasa, reproducción e inmunidad, entre otros. En especies zootécnicas como bovinos y cerdos, se identifican polimorfismos del gen leptina asociados con la ingesta de alimentos, características de crecimiento y de la canal, y la calidad de la carne, los cuales son de interés para los productores pecuarios. El objetivo de esta investigación fue identificar polimorfismos del gen leptina en el exón 3 de ovinos Katahdin. El estudio consistió en un muestreo de 234 animales con una edad entre 3 y 18 meses, a los cuales se les extrajeron 5 mL de sangre de la vena yugular. La extracción de ADN a partir de sangre se realizó usando el kit Wizard® Genomic ADN Purification (PROMEGA). Para la amplificación del fragmento del gen leptina (Gen Bank: AJ512639) se utilizaron los primers con las siguientes secuencias Forward: 5′-AGGAAGCACCTCTACGCTC-3′, Reverse: 5′-CTTCAAGGCTTCAGCACC-3. El tamaño del producto amplificado fue de 471 pb. La variación alélica del gen leptina se obtuvo por PCR-SSCP y el análisis de secuenciación confirmo polimorfismos del nucleótido simple (SNPs) en el exón 3 del gen leptina. Las secuencias identificadas comparten alta similitud con las secuencias de leptina publicados en otras razas de ovinos. Los resultados confirman la presencia de tres polimorfismos (alelos 01, G y T), que corrobora la variación de tres alelos del exón 3 del gen leptina de ovinos Katahdin. Sin embargo es necesario identificar la presencia de SNPs y validar la asociación con los genotipos en ovinos Katahdin, antes de la implementación de programas en mejoramiento animal. _______________ ABSTRACT:

The leptin gene is located on the fourth chromosome in the ovine and bovine genome. There are six different isoforms of the leptin receptor expression of same mRNA. Leptin receptors have been identified for the hormone leptin in the hypothalamus and other peripheral tissues. Leptin is a hormone involved in physiological processes related to the regulation of energy metabolism, feed intake, fat deposition, reproduction and immunity, among others things. In farm animals species such as cattle and swine, leptin gene polymorphisms was associated with feed intake, growth and carcass composition, and meat quality, which are of interest to livestock producers. The aim of this research was to identify polymorphisms of the leptin gene in exon 3 of Katahdin sheep. The study consisted of a sample of 234 animals with aged between 3 and 18 months, which were extracted 5 mL of blood from the jugular vein. DNA extracted from blood was performed using the Wizard®Genomic DNA Purification kit (Promega). For amplification of the leptin gene (GenBank: AJ512639) primers were used with the following sequences Forward: 5'-AGGAAGCACCTCTACGCTC-3 'Reverse: 5'-CTTCAAGGCTTCAGCACC-3. The size of the amplified product was 471 bp Allelic variation leptin gene was obtained by PCR-SSCP and sequence analysis of single nucleotide polymorphisms confirmed (SNPs) in exon 3 of the leptin gene. The identified sequences share high similarity with published sequences of leptin in other sheep breeds. The results confirm the presence of three polymorphisms (alleles 01, G and T), which bear out of three alleles in exon 3 of the leptin gene in Katahdin sheep. However it is necessary to identify the presence of SNPs and validate the association with genotypes in sheep Katahdin, before implementing livestock breeding programs.

Doctoral thesis

ADN Polimorfismo SNP Exón Ovinos Katahdin Consumo DNA Polymorphism Exon Katahdin sheep Intake Ganadería Doctorado BIOLOGÍA Y QUÍMICA CIENCIAS DE LA VIDA GENÉTICA CITOGENÉTICA ANIMAL

Variabilidad genética y cuantificación genómica en especies del complejo Agave potatorum basado en marcadores morfológicos y citométricos

Elí Secundino Porras Ramírez (2017)

La caracterización morfológica y molecular de las especies silvestres es un paso inicial importante en la selección de rasgos para el aprovechamiento y domesticación agronómica, lo mismo ocurre con proyectos diseñados para la conservación. El objetivo de este trabajo fue determinarla diversidad genética intra e interespecífica del complejo Agave potatorum (García-Mendoza) con el empleo de marcadores morfológicos y citométricos, para lo cual fue necesario implementar la fenotipificación y la citometría de flujo, para la determinación del contenido de ADN nuclear y nivel de ploidia. Se evaluaron once características morfológicas distintivas reportadas en la literatura para los agaves.Para la caracterización fenotípica se realizó un Análisis de Componentes Principales (ACP), árboles filogenéticos y análisis de correlación utilizando como grupo hermano la especie de Agave karwinskii. Se midieron y cuantificaron los estomas de las láminas foliares de las cuatro especies (Agave potatorum, A. seemanniana, A. nussaviorum y A. karwinskii) por su parte abaxial y adaxial para obtener la densidad estomática, índice estomático y tamaño de estomas; se realizó un ANOVA para ver si existían diferencias significativas en estos valores entre especies y entre láminas foliares.Finalmente se realizó la cuantificación del contenido de ADN nuclear y la estimación del nivel de ploidía mediante la citometria de flujo con Pisum sativumcomo estándar externo. En el mismo sitio de estudio y en forma silvestre, se encontraron las especies de A. karwinskii y las tres especies del complejo: Agave potatorum Zucc., A. seemanniana García-Mend. y A. nussaviorum subsp. nussaviorum García-Mend., con la excepción de la subespecie Agave nussaviorum subsp. deltoidea que no se registró su presencia en el área de estudio.Los valores de los dos primeros componentes(F1= 46.13 y F2= 33.99)principales explicaron más del 80% de la varianza morfológica total. El dendograma de agrupamiento aglomerativo jerárquico (CAJ) mostró similitud entre las especies del complejo, dividiéndolas en dos grupos hermanos:el primer grupo estuvo formado por Agave nussaviorum y A. potatorum, y el segundo fue por A. seemanniana.Mientras que, la especieA. karwinskii mostró distancia genética conforme a su función de especie alejada de la raíz o "outgroup". El análisis de ANOVA no mostró diferencia significativa para ninguna de las variables estomáticas analizadas entre especies, lo mismo ocurrió entre las superficies de las láminas foliares. Las cuatro especies resultaron ser diploides, dentro del complejo la variación del contenido de ADN fue en un rango de 7.33 pg/2C en A. nussavioruma 7.90 pg/2C en A. seemanniana.Los resultados obtenidos en este trabajo sugieren cierto grado de variabilidad genética expresada en las características morfológicas y citométricas de los agaves pertenecientes a este complejo en Oaxaca los cuales pueden ser utilizados en futuros estudios moleculares, domesticación y recuperación de poblaciones reducidas.

Master thesis

BIOLOGÍA Y QUÍMICA Fenotipo ADN Estomas

Estandarización de técnicas de extracción de ADN en sementales porcinos para evaluar la frecuencia de los genes ESR y PLRL con PCR-RFLP

EVA DOLORES RAMOS (2007)

Tesis ( Maestría en Ciencias, especialista en Ganadería).- Colegio de Postgraduados, 2007.

Con el objeto de estandarizar y perfeccionar una técnica de extracción y purificación

de ADN a partir de sangre, semen y pelo de porcinos, se obtuvieron muestras de

35 sementales de línea materna Yorkshire y Landrace, en los cuales se valoró la

frecuencia de los genes ESR y PRLR mediante PCR-RFLP. La extracción de ADN

a partir de sangre y semen únicamente se estandarizaron. El pelo de sementales

fue la mejor opción para obtener una alta cantidad y calidad de ADN. Se identificó la

frecuencia de dos genes relacionados con prolificidad: Receptor de Prolactina

(PRLR) y Receptor de Estrógeno (ESR); en su amplificación se utilizó PCR-RFLP´s

y se identificaron los genotipos. En esta identificación se utilizó la enzima Alu I para

PRLR y Pvu II para ESR. Los resultados obtenidos, con la muestra de sementales,

mostraron que los genotipos asociados a los genes PRLR y ESR no se encontraron

en equilibrio Hardy-Weinberg (2, p<0.05). El alelo favorable B de los genes ESR y

el favorable A de PRLR mostró frecuencias de 0.14 y 0.21, respectivamente. No

ocurrieron animales homocigotos para el genotipo BB en el gen ESR. No hubo

diferencias (p>0.05) entre los genotipos asociados con el receptor de la prolactina y

el receptor de estrógeno en las características de prolificidad de las piaras,

consecuencia probablemente del reducido número de sementales muestreado._______In order to standardizing and perfecting a technique of extraction and DNA

purification from blood, semen and hair of pigs, samples of 35 sires of Yorkshire and

Landrace maternal lines were obtained, and the frequency of the genes ESR and

PRLR were valued using PCR-RFLP. The DNA extraction from just blood and

semen were standardized. The hair of the boars technique was the best option to

extract and to purify DNA, giving as a result a high amount of quantity and quality.

Once extracted the hair DNA the identification of the frequency of two genes related

to prolificacy came next: Receptor of Prolactine (PRLR) and Estrogen Receptor

(ESR). For the amplification of these genes PCR-RFLP´s was used and the

genotypes were identified. In this identification the enzyme Alu I for PRLR and Pvu II

for ESR were used. The obtained results, with the sample of boars, showed that the

genotypes associated to genes PRLR and ESR were not in Hardy-Weinberg

balance (2, p<0.05). The allele favourable B of the ESR and the allele A of the

PRLR genes showed frequencies of 0.14 and 0.21, respectively. Homozygote

animals for genotype BB in gene ESR did not happen. There were no differences

(p> 0.05) between the genotypes associated with prolificacy, the pig estrogen

receptor and the pig prolactin receptor, consequence probably of the reduced

sampling number of boars.

Master thesis

ADN pelo sangre semen cerdos PCR-RFLP CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

Factores involucrados en la respuesta del picudo del agave hacía el compuesto feromonal 2-metil-4-octanona y su manejo con agave fermentado e insecticidas sintéticos

AUSENCIO AZUARA DOMÍNGUEZ (2013)

Tesis (Doctorado en Ciencias, especialista en Entomología y Acarología).- Colegio de Postgraduados, 2013.

El picudo del agave Scyphophorus acupunctatus produce una feromona de agregación que atrae ambos sexos. Sin embargo, la respuesta es baja debido a diferentes factores que interfieren, por lo que es necesario un mejor conocimiento de los factores participantes, así mismo, buscar nuevas alternativas de control. En la presente investigación se plantearon los siguientes objetivos: 1) Determinar la participación del sexo, edad y de la estructura genética en la respuesta electrofisiológica y de comportamiento de búsqueda de S. acupunctatus al compuesto principal de su feromona de agregación. 2) Evaluar la eficiencia de la planta de agave tequilero en estado fermentado en el trampeo del picudo e identificar los compuestos volátiles atractivos para este insecto. 3) Determinar la efectividad de insecticidas con diferente modo de acción en el control de S. acupunctatus. Se determinó que la respuesta electrofisiológica y de comportamiento de búsqueda del picudo del agave al 2-metil-4-octanona no es igual entre las poblaciones de insectos procedentes de diferentes cultivos y regiones geográficas. En ambas respuestas de S. acupunctatus interviene la edad de los adultos y los cambios genéticos presentes en el ADN mitocondrial. Así también, se observó que las trampas cebadas con la feromona junto con el material vegetal en estado fermentado son más eficientes en el trampeo del picudo del agave que aquellas que no contenían material fermentado. En el material fermentado se identificaron volátiles atractivos que producen sinergia en la respuesta del picudo del agave hacia su feromona de agregación. Por último, se determinó que los insecticidas malatión, endosulfán, metomilo y fipronil son eficaces en el control de picudo del agave. _______________ ABSTRACT:

The agave weevil Scyphophorus acupunctatus produces an aggregation pheromone that attracts both sexes. However, the response is low due to various interfering factors, so we need a better understanding of the factors involved, also, finding new ways of control. The present study had the following objectives: 1) to investigate the effect of sex, age and genetic structure in the electrophysiological response and search behavior of S. acupunctatus to 2-methyl-4-octanone. 2) To evaluate the efficiency of trapping S. acupunctatus by using the fermented head of A. tequilana and to identify the volatile compounds involved in attraction of the agave weevil. 3) To evaluated the effectiveness of synthetic insecticides of different toxicological groups to control S. acupunctatus. We show that the electrophysiological and behavioral response of the agave weevil to 2-methyl-4-octanone differs among the populations of insects from different crops and geographic regions. This suggests that in both responses of S. acupunctatus age of insects and the genetic changes in mitochondrial DNA are involved. Also, we observed that the traps baited with the pheromone and fermented head caught more weevils than the other treatments. The fermented agave head increased the attraction of S. acupunctatus, while non fermented head did not contribute significantly. The following volatiles were identified in the fermented head: ethyl acetate, ethanol, 2-butanol, and acetic acid. Whereas in the non fermented head, 24 volatile compounds were collected, they were different than those identified in the fermented head. Finally, we determined that the malathion, endosulfan, methomyl, and fipronil showed high biological efficacy.

Doctoral thesis

Scyphophorus acupunctatus Electroantenografía Olfatómetro ADN Mitocondrial Trampeo de adultos Insecticidas sintéticos Electroantennography Olfactometer Mitochondrial DNA Trapping Synthetic insecticides Entomología y Acarología Doctorado CIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA

La genómica en la investigación científica y en la gestión de la vida silvestre en México

The use of Genomics in scientific research and management of wildlife in Mexico

JULIO CESAR CANALES DELGADILLO LEONARDO CHAPA VARGAS MAURICIO COTERA CORREA LAURA MAGDALENA SCOTT MORALES (2015)

"México alberga una diversidad biológica excepcional que lo coloca entre los principales países megadiversos, pues posee tres de las 34 ecorregiones del mundo y zonas consideradas áreas silvestres a nivel mundial, como los desiertos de Chihuahua, Sonora y California; su importancia radica en que reúne alrededor de 70 % de su hábitat original en buenas condiciones y una densidad poblacional humana menor a 5 habitantes km-2. El uso de la genómica como herramienta en la investigación científica en este país tuvo sus inicios a finales de 1930 con trabajos encaminados al mejoramiento genético de cultivos comerciales y a entender los fundamentos ecológicos de la variación genética en Drosophila pseudooscura, pero hasta los años 80 y 90 comenzó el estudio de la flora y la fauna bajo esa perspectiva. Sin embargo, a pesar del potencial que las técnicas genómicas ofrecen para mejorar el desarrollo de estrategias y políticas de gestión que aseguren la producción de alimentos y la preservación de especies, no han sido extensamente utilizadas. Se presenta una revisión de las áreas del conocimiento en la vida silvestre en las que la genómica ha sido incorporada para abordar poblaciones naturales y se discuten los aspectos en los que puede incidir dentro del manejo y conservación de taxa de importancia biológica y comercial."

"Mexico has a unique biodiversity that places it within the list of megadiverse countries; it has three of the 34 ecoregions of the world and sites that are considered wilderness areas worldwide. The use of Genomics as a tool for research in Mexico began in the late 1930s with work aimed at the genetic improvement of commercial crops and to understand the ecological foundations of the genetic variation in Drosohpila pseudooscura, however, it wasn't until the decades of 1980-1990s that these tools were used for the study of natural populations of flora and fauna with purposes of conservation and management. Nonetheless, the potential that genomic tools have to improve the strategies and policies of management to ensure food production and conservation of wildlife in Mexico, these have not been widely applied. In this paper the areas of knowledge in wildlife where genomics have been applied in the study of natural populations of flora and fauna in Mexico were reviewed, and the practical applications of genomics for management and conservation of species of biological and commercial concern were discussed."

Article

ADN Conservación Genómica Manejo Marcadores moleculares Vida silvestre BIOLOGÍA Y QUÍMICA

Variabilidad genética y cuantificación genómica en especies del complejo Agave potatorum basado en marcadores morfológicos y citométricos

Elí Secundino Porras Ramírez (2017)

El objetivo de este trabajo fue determinarla diversidadgenética intra e interespecíficadel complejo Agave potatorum (García-Mendoza) con el empleo de marcadores morfológicos y citométricos, para lo cual fue necesario implementar la fenotipificación y la citometría deflujo, para la determinación del contenido de ADN nuclear ynivel de ploidia. Se evaluaron once características morfológicas distintivas reportadas en la literatura para los agaves.Para la caracterización fenotípicase realizó un Análisis de Componentes Principales (ACP), árboles filogenéticos y análisis de correlaciónutilizando como grupo hermano la especiede Agave karwinskii. Se midieron y cuantificaron los estomas de las láminas foliares de las cuatroespecies(Agave potatorum, A. seemanniana, A. nussaviorum y A. karwinskii)por su parte abaxial y adaxial para obtener la densidad estomática, índice estomático y tamaño de estomas; se realizó un ANOVA para ver si existían diferencias significativas en estos valores entre especies y entre láminas foliares.Finalmente se realizó la cuantificación del contenido de ADN nuclear y la estimación del nivel de ploidía mediante la citometria de flujo con Pisum sativumcomo estándar externo. En el mismo sitio de estudio y en forma silvestre, se encontraron las especies de A. karwinskii y las tres especies del complejo: Agave potatorum Zucc., A. seemanniana García-Mend. y A. nussaviorum subsp. nussaviorum García-Mend., con la excepción de la subespecie Agave nussaviorum subsp. deltoidea que no se registró su presencia en el área de estudio.

Master thesis

BIOLOGÍA Y QUÍMICA Fenotipo ADN Estomas

Impacto del estrés agudo en la proliferación, sobrevivencia y apoptosis hipocámpica en ratas hembras con diferentes condiciones endócrinas

AIDA ELIZABETH SOTO MEDINA (2017)

Al comparar los grupos de animales no sometidos a estrés, los niveles de hormonas gonadales parecieran actuar de manera inversamente sobre la proliferación con diferencias significativos solo entre los animales ovx y en proestroestro (p<0.05), lo que suguiere la presencia de corticosterona a causa del estrés un factor que afecta la Neurogénesis de manera diferencial según la cantidad de hormonas gonadales presentes en el organismo. En cuanto a la sobrevivencia temprana se observó disminución en los animales estresados respecto a su grupo control, valor significativo solo en los grupos que contaban con su fente natural de hormonas gonadales (p<0.01), esto y los datos presentados en la proliferación celular de animales en metaestr-diestro y ovx hace sugerir la ausencia de hormonas gonadales un factor que incapacita a los animales a contender con el estrés a nivel de la neurogénesis. En el grupo de animales en proestro–estro (niveles de hormonas gonadales elevados) se observa que la FST es capaz de inducir la proliferación de células hipocampales no así la supervivencia de estas nuevas células, la cual se ve favorecida por la presencia de hormonas gonadales, no así por el estrés.

Al evaluar la apoptosis se observa que efectivamente es en el grupo en proestro–estro que fue sometido a la prueba de Porsolt donde se observa mayor muerte (p<0.001); sin embargo, el número de cuentas esta muy por debajo de la diferencia que resulta de la expresión de Ki67 y BrdU, por lo que se propone que estas células están en arresto en la fase G0 del ciclo celular, muy probablemente a consecuencia del estrés que induce la prueba de porsolt. Es así que proponemos a las hormonas gonadales femeninas como factores que disminuyen las conductas tipo depresivas, promueven la reactividad del eje HHA con el aumento de la corticosterona, incrementan la proliferación hipocampal incluso frente al estrés y proporcionan efecto neuroprotector respecto a la sobrevivencia ix celular, que a pesar de verse disminuida por el estrés que induce la FTS, no se refleja en una muerte celular importante, haciendo suponer que las células proliferantes han sido arrestadas.

El estrés es la respuesta del organismo ante la pérdida de la homeostasis ya que activa el eje Hipotálamo-Hipófisis-glándula Adrenal (HHA) liberando glucocorticoides (GCs) que le permiten al organismo adaptarse. La exposición intensa o prolongada a los glucocorticoides, se ha relacionado con alteraciones en el hipocampo, una estructura que además de expresar gran número de receptores para esta hormona, está involucrada con las emociones, la memoria, el aprendizaje y en donde ocurre de manera constitutiva la neurogénesis. Es sabido que los ejes HHA e Hipotálamo-Hipófisis-Gónadas (HHG) interactúan afectando los niveles de glucocorticoides, así como la expresión de sus receptores en el hipocampo, por tal motivo se propone que los niveles y tipo de hormonas gonadales son un factor que afecta la neurogénesis hipocampal ante el estrés y con ello el desarrollo de conductas depresivas. Siendo el estrés prolongado un factor relacionado con el deterioro de la neurogénesis, es de llamar la atención que los efectos reportados en individuos expuestos a una sola sesión de estrés no son consistentes y que estos varían según el tipo y la intensidad del estresor, así como las características y antecedentes del individuo.

Por tal motivo el presente trabajo evaluó el efecto del estrés agudo que induce la prueba de Porsolt también llamada prueba de nado Forzado (FST) sobre la proliferación, sobrevivencia y apoptosis de células hipocampales, así como el desarrollo de conductas tipo depresivas en ratas hembra que se encontraban en las fases de proestro-estro, donde los niveles de hormonas gonadales son elevados y en metaestro-diestro, fases caracterizadas por bajos niveles de hormonas gonadales. Aunado a esto, se evaluó un tercer grupo de animales que habían sido privados de vii su principal fuente natural de hormonas gonadales a través de la ovariectomia, por lo que su condición endocrina es considerada como nula. En cuanto a la parte conductual esta se determino cuantificando las conductas de movilidad e inmovilidad que el animal mostro durante la FST, mientras que la proliferación celular, sobrevivencia temprana y apoptosis de las células hipocampales se realizó mediante la técnica de inmunohistoquímica utilizando los marcadores Ki67, BrdU y Caspasa 3 respectivamente.

Los resultados obtenidos mostraron en la parte conductual una disminución de la conducta de desesperanza en animales en proestro-estro (hormona gonadal elevada) que fueron sometidos a una segunda sesión de nado forzado (p≤0.05), no así en los animales que se encontraban en metaestro-diestro (hormona gonadal baja) u ovariectomizados (sin hormonas gonadales), lo que nos lleva a corroborar el efecto neuroprotector que propone la presencia de las hormonas gonadales. En cuanto a los niveles de corticosterona en sangre se observa un aumento en los animales sometidos a estrés que se encontraban gonadalmente intactos (p<0.01), no así en los ovareictomizados que también fueron sometidos a estrés (ns) lo que nos lleva a proponer a las hormonas gonadales como factores que favorecen la activación del eje HHA ante el estrés. En relación a la Neurogénesis, se observó un incremento en la proliferación celular de animales sometidos a estrés vs aquellos que no lo fueron, también llamados grupo control, dato significativo solo en los animales que se encontraban en las fases de proestro-estro (hormona alta) (p<0.001), lo que nos lleva a proponer que la activación del eje HHA en presencia de hormonas gonadales favorece la proliferación de células hipocampales.

Master thesis

Ratas Grucocorticoides ADN ACTH BIOLOGÍA Y QUÍMICA